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干货 | 高效液相色谱常见问题与解决方法汇总

医药大世界  · 公众号  · 药品  · 2017-10-19 20:11

正文


1

压 力 异 常

操作压力的变化往往是故障的征兆。从下表中找出所观察到的现象,并在右侧的列表中参考相应的解决方法。




A、没有压力显示,没有流动相流动


原 因

解决方法

1、电源问题

1、接通电源,开机

2、保险丝被烧坏

2、更换保险丝

3、控制器设定不正确或设定失败

3、a、采取恰当的设定

b、修理或更换控制器

4、柱塞杆折断

4、更换柱塞杆

5、泵头内有空气

5、溶剂脱气、启动泵抽出空气

6、流动相不足

6、a、补充流动相

b、更换入口滤头

7、单向阀损坏

7、更换单向阀

8、漏液

8、拧紧或更换手紧接头


B、 流动相流动正常,但没有压力显示


原 因

解决方法

1、仪表损坏

1、更换仪表

2、压力传感器损坏

2、更换压力传感器


C、 压力持续偏高


原 因

解决方法

1、流速设定过高

1、调整流速设定

2、柱前筛板堵塞

2、a、在允许情况下反冲色谱柱

b、更换筛板

c、更换色谱柱

3、流动相使用不当或缓冲盐的结晶沉淀

3、a、使用恰当的流动相

b、冲洗色谱柱

4、色谱柱选择不当

4、选择恰当的色谱柱

5、进样阀损坏

5、清洗或更换进样阀

6、柱温过低

6、提高温度

7、控制器失常

7、修理或更换控制器

8、保护柱阻塞

8、清洗或更换保护柱

9、在线过滤器阻塞

9、清洗或更换在线过滤器


D、压力持续偏低


原 因

解决方法

1、流速设定过低

1、调整流速

2、系统漏液

2、确定漏液位置并维修

3、色谱柱选择不当

3、选择恰当的色谱柱

4、柱温过高

4、降低温度

5、控制器失常

5、维修或更换控制器


E、压力不断上升


原 因

解决方法

1、见列表C

1、见列表C


F、压力降为零


原 因

解决方法

1、见列表A、B

1、见列表A、B


G、压力不断下降,但不回零


原 因

解决方法

1、见列表D

1、见列表D


H、压力波动


原 因

解决方法

1、泵中有气体

1、a、溶剂脱气

b、从泵中除去气体

2、单向阀损坏

2、更换单向阀

3、泵密封损坏

3、更换泵密封

4、脱气不充分

4、a、溶剂脱气

b、改变脱气方法(使用在线脱气法等)

5、系统漏液

5、确定漏液位置并维修

6、使用梯度洗脱

6、由于流动相粘度的变化引起的压力波动



2

通常可以通过拧紧或更换管路接头来解决漏液的问题。但值得注意的是过份拧紧会导致金属接头的漏液和塑料接头的磨损。如果通过稍微拧紧接头不能解决漏液的问题,就必须将接头取下,检查是否损坏(例如,卡套损坏、密封表面有杂质);损坏的接头应该更换掉。




A、 接头处漏液


原 因

解决方法

1、接头松动

1、拧紧

2、接头磨损

2、更换

3、接头过紧

3、a、拧松,再重新拧紧

b、更换

4、接头被污染

4、a、拆下清洗

b、更换

5、部件不匹配

5、使用同一品牌的配件


B、 泵漏液


原 因

解决方法

1、单向阀松动

1、a、拧紧单向阀(不必拧的过紧)

b、更换单向阀

2、接头松动

2、拧紧接头(不必拧的过紧)

3、混合器密封损坏

3、a、更换混合器密封

b、更换混合器

4、泵密封损坏

4、维修或更换泵密封件

5、压力传感器损坏

5、维修或更换压力传感器

6、脉冲阻尼器损坏

6、更换脉冲阻尼器

7、比例阀损坏

7、a、检查隔膜,如果漏液立即更换

b、检查手紧接头,损坏的立即更换

8、放空阀的损坏

8、a、拧紧放空阀

b、更换放空阀


C、 进样阀漏液


原 因

解决方法

1、转子密封损坏

1、重新安装或更换进样阀

2、定量环阻塞

2、更换定量环

3、进样口密封松动

3、调整

4、进样针头尺寸不合适

4、使用恰当的进样针

5、废液管中产生虹吸

5、保持废液管高于废液液面

6、废液管阻塞

6、更换或疏通废液管


D、 色谱柱漏液


原 因

解决方法

1、尾端接头松动

1、拧紧接头

2、卡套内有填料

2、拆下、清洗卡套、重新安装

3、筛板厚度不合适

3、使用合适的筛板(参考下表)

筛板选择指导


物质粒径

筛板孔径

3-4u

0.5u

5-20u

2u


E、 检测器漏液


原 因

解决方法

1、流通池垫片损坏

1、a、避免过大的背景压力(压力降)

b、更换垫片

2、流通池窗破碎

2、更换窗口

3、手紧接头漏液

3、拧紧或更换

4、废液管阻塞

4、更换废液管

5、流通池阻塞

5、重新安装或更换



3

液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来。其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决;而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键。




A、 峰拖尾


原 因

解决方法

1、筛板阻塞

1、a、反冲色谱柱

b、更换进口筛板

c、更换色谱柱

2、色谱柱塌陷

2、填充色谱柱

3、干扰峰

3、a、使用更长的色谱柱

b、改变流动相或更换色谱柱

4、流动相PH选择错误

4、调整PH值。对于碱性化合物,低PH值更有利于得到对称峰

5、样品与填料表面的溶化点发生反应

5、a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂

b、更改色谱柱


B、 峰前延


原 因

解决方法

1、柱温低

1、升高柱温

2、样品溶剂选择不恰当

2、使用流动相作为样品溶剂

3、样品过载

3、降低样品含量

4、色谱柱损坏

4、见A1、A2


C、 峰分叉


原 因

解决方法

1、 保护柱或分析柱污染


1、取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞,拆下来清洗。如果问题仍然存在,可能是柱子被强保留物质污染,运用适当的再生措施。如果问题仍然存在,入口可能被阻塞,更换筛板或更换色谱柱。

2、样品溶剂不溶于流动相

2、改变样品溶剂。如果可能采取流动相作为样品溶剂。


D、 峰变形


原 因

解决方法

1、样品过载

1、减少样品载量


E、 早出的峰变形


原 因

解决方法

1、样品溶剂选择不恰当

1、a、减少进样体积

b、运用低极性样品溶剂


F、 早出的峰拖尾程度大于晚出的峰


原 因

解决方法

1、柱外效应

1、a、调整系统连接(使用更短、内径更小的管路)

b、使用小体积的流通池


G、 K’ 增加时,脱尾更严重


原 因

解决方法

1、二级保留效应,反相模式

1、a、加入三乙胺(或碱性样品)

b、加入乙酸(或酸性样品)

c、加入盐或缓冲剂(或离子化样品)

d、更换一支柱子

2、二级保留效应,正相模式

2、a、加入三乙胺(或碱性样品)

b、加入乙酸(或酸性样品)

c、加入水(或多官能团化合物)

d、试用另一种方法

3、二级保留效应,离子对

3、加入三乙胺(或碱性样品)


H、 酸性或碱性化合物的峰拖尾


原 因

解决方法

1、缓冲不合适

1、a、使用浓度50-100mM的缓冲液

b、使用Pka等于流动相PH值的缓冲液


I、 额外的峰


原 因

解决方法

1、样品中有其他组份

1、正常

2、前一次进样的洗脱峰

2、a、增加运行时间或梯度斜率

b、提高流速

3、空位或鬼峰

3、a、检查流动相是否纯净

b、使用流动相作为样品溶剂

c、减少进样体积


J、 保留时间波动


原 因

解决方法

1、温控不当

1、调好柱温

2、流动相组分变化

2、防止变化(蒸发、反应等)

3、色谱柱没有平衡

3、在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱


K、







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