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说说稳转系那些事

解螺旋 · 公众号 · 医学 · 2017-03-25 20:22

正文

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可索取DNA序列分析软件。

Discussion写作模板 | SCI作图 | qPCR曲线 | 自噬相关mTOR信号 | ELISA实验

作者：凌风（本文为读者来稿，转载请注：解螺旋·医生科研助手）

稳转系嘛

现在哪个做实验能少的了稳转系？

随随便便你不敲个东西

过表达个东西

都不好意思投文章！

关于稳转系

你需要知道的是

那些拿病毒转染的才是稳转系

像那些siRNA

质粒瞬转的

都！不！叫！

你哪里见过稳转系

还要隔两天就要转个小干扰

转个质粒来维持的哇？

Step1：构建质粒

你想敲除啥

想过表达啥

就把它p到你心仪的载体中

这个当然可以找公司来做啦

你还可以挑选

想不想要荧光

要带什么抗性

这个红的绿的

blas/puro抗性就看您心情了~

Step2：包病毒

把目标质粒

包装质粒

一起导到工具细胞中

过个48小时

收个病毒

浓缩下

你就可以去-80°C保存啦~

Step3：转染细胞

把你的target 细胞铺到板里

40-50%的密度就行

（太多就容易满啦，转染效率就不高了）

把病毒和polybrene一块加进去

再来两天

就等着看荧光吧！

（知道为啥有人钟爱荧光了么）~

Step4：筛选稳转系

亮了，你就可以开始筛选了！

怎么筛呢?

就是这样啦

将细胞稀释到1000个细胞/mL

将抗生素做一个浓度梯度

最好你可以看看文献里

别人对你的target细胞是哪个浓度

比如

1ug/mL，2ug/mL，3ug/mL，......，10ug/mL

找出在10~14天内

细胞全部死亡的最低BLA浓度

筛选时用这个浓度

或者再高一个梯度都可以啦！

Puro筛一两个星期

最少得传几代吧~

blas你就得多筛会啦

最少也得两三周吧！

接下来

就是你亮亮的稳转系啦！

是不是很得意！

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