巨噬细胞对于mEV（微生物群衍生的细胞外囊泡）的清除作用还算是有点新奇的，今天这篇文章，是华中科技大学同济医学院发表在12.2分的Gut Microbes上的文章。首先IBD（肠道炎症）中，肠道微生物群衍生的mEV，会通过将细菌产物输送到宿主细胞中来调节炎症反应，而他们的研究就是基于这个mEV的：
首先他们进行了IBD小鼠的16S rRNA的原位杂交和qPCR分析，来测量结肠组织中细菌DNA的浓度，发现与健康小鼠相比，IBD小鼠结肠组织中的16S rRNA的丰度增加，这就说明了IBD小鼠中微生物在肠道黏膜中得到了富集。同时他们提取了IBD小鼠结肠内容物中的mEVs，通过分析发现mEVs中含有大量的微生物DNA（首先确认在IBD中的确含有这样的包含了微生物DNA的mEV，则可以提出可能存在因果性的假设，这其实也是柯霍氏法则验证的一部分，不清楚柯霍氏法则的话，可以去看看《轻松的文献导读》和《列文虎克读文献》）：
在他们的另一篇研究中，表明CRIg+的巨噬细胞，是肠道中清除含有微生物DNA的mEV的关键免疫细胞：
为了确定在这个过程中CRIg+的巨噬细胞的功能，他们敲除了小鼠的CRIg蛋白，然后把PKH26标记的含有微生物DNA的mEVs注射入小鼠的结肠，结果发现缺失了CRIg+的巨噬细胞后，更多的mEVs侵入肠粘膜，细菌DNA浓度也明显升高。这里他们是为了说明肠道CRIg+巨噬细胞在mEvs的清除中起重要作用，通过敲除了CRIg蛋白，来实现这个验证（但是在验证的过程中用了CRIg的敲除，而不是巨噬细胞特异性敲除CRIg，这可能会造成肯定后件的问题，不清楚肯定后件的话，可以去看看《列文虎克读文献》和《信号通路是什么鬼？》系列）：
接着他们通过对于CRIg蛋白的敲除和过表达（这也是柯霍氏法则的验证过程，通过CRIg蛋白的有无，来验证其具体对于IBD的炎症产生的功能，不清楚柯霍氏法则的话可以看看《轻松的文献导读》和《列文虎克读文献》），来验证了CRIg蛋白于对DSS诱导的结肠炎发挥保护作用，而CRIg的表达水平与结肠炎症和细菌DNA丰度相关，这也就间接地说明了CRIg+的巨噬细胞对于mEVs的清除功能：
而另一方面提取的mEVs对小鼠肠道进行注射，在DSS诱导了肠道炎症后，又进一步加剧了肠道的炎症反应，也就是说肠道mEV会加重DSS诱导的结肠炎的炎症损伤：
要是熟悉信号通路的话，大家应该还记得有一种DNA可以激活炎症的信号通路（这个大家如果看过《信号通路是什么鬼？》系列的话，应该都比较熟悉cGAS-STING信号通路了吧，不熟悉的回去复习下，这个就是通过dsDNA激活下游炎症反应的）。既然mEVs中包裹的是微生物的DNA，那么诱导上皮细胞中的屏障功能损伤和炎症反应的，是不是mEVs中的微生物DNA呢？他们通过电穿孔去除了mEVs中的DNA，对肠道上皮细胞进行诱导，发现没有DNA的mEVs无法再激活上皮细胞中的炎症反应。同时使用了STING的抑制剂，也可以阻断这个过程。也就是说， mEVs中的微生物DNA是关键的载物，可以通过cGAS-STING信号通路，诱导上皮细胞中的屏障功能损伤和炎症反应：
既然说明了mEVs中的DNA是激活上皮细胞炎症的关键，那么接下去就要分析mEVs中DNA激活的下游cGAS-STING信号通路是否也是关键因素了，于是他们就对下游的STING进行了敲除。使用了mEVs及无DNA的mEVs刺激细胞，并分别敲除STING，结果发现敲除了STING后，mEVs则无法再激活上皮细胞的炎症反应，炎症相关细胞因子的含量也降低了：
刚才的研究中也表明，CRIg+巨噬细胞负责清除含有微生物DNA的mEVs，那么缺失了CRIg则会造成mEVs的增多，也就会促进炎症，于是他们为了确定这个过程，就对CRIg敲除的小鼠，进行了STING的敲减抑制。结果发现敲减STING也可以抑制CRIg敲除的小鼠的DSS诱导的肠道炎症反应（其实更精致一点的验证的话，可以分别对于小鼠的上皮细胞敲减STING，并且针对性地对巨噬细胞敲除CRIg蛋白，这样就可以有效地避免肯定后件的逻辑谬误，否则这里还是会存在一定的逻辑漏洞，不清楚肯定后件的话，可以去看看《列文虎克读文献》和《信号通路是什么鬼？》系列）：
最后他们形成了这样的示意图，也就是在IBD患者中，由于CRIg+巨噬细胞减少，会导致含有微生物DNA的mEVs无法被清除。而这些mEVs会激活肠道上皮细胞中的cGAS-STING信号通路，从而导致肠道的炎症和屏障功能损伤：
总的来说，这篇文章在叙事上，还是可以的，上游到下游的验证，还是有一定的实验结果作为支撑的。如果能通过特异性地敲除或者过表达，来突出CRIg+巨噬细胞以及cGAS-STING信号通路在这个过程中的功能，可能效果会更好。好了，今天就先策到这里吧，有兴趣的话，可以看看原文，祝你们心明眼亮。
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