目前分析骨组织中细胞结构的方法主要取决于组织切片。
例如，最近的一项研究显示了小鼠股骨的300μm切片中的不同细胞群。
同样，可以在半骨切片中检查造血干细胞的分布。
值得注意的是，这种常规方法模糊了特定的细胞结构，此外，
组织切片可能对许多骨组织（例如，脊柱，颅骨和四肢）具有挑战性。
光学清除技术（例如CLARITY，iDISCO + ，uDISCO和CUBIC）的开发使得能够对完整组织中的各种细胞结构进行3D成像。
然而，这些方法完全依赖于荧光标记，它们的一般实施可能受到以下几个因素的限制：
（1）缺乏可用的基因荧光标记方法; （2）研究需要同时成像两种或多种不同的细胞结构; （3）繁殖小鼠系以整合多个遗传等位基因的时间和成本。
因此，
非常需要用于检测完整骨中的内源表位并且同时与3D荧光成像的光学清除相容的全组织免疫标记程序，但尚未成功尝试
。
2019年8月23日，北京大学杨竞团队在
Cell Research
在线发表题为“
BoneClear: whole-tissue immunolabeling of the intact mouse bones for 3D imaging of neural anatomy and pathology
”的研究论文，该研究
报道了一种
新的BoneClear方法，用于在成年小鼠的完整，未切割的骨组织中对不同细胞结构的免疫标记。
这项技术进步有望在未来的观察中能为不同的研究领域服务。
目前分析骨组织中细胞结构的方法主要取决于组织切片。
例如，最近的一项研究显示了小鼠股骨的300μm切片中的不同细胞群。同样，可以在半骨切片中检查造血干细胞的分布。值得注意的是，这种常规方法模糊了特定的细胞结构，此外，
组织切片可能对许多骨组织（例如，脊柱，颅骨和四肢）具有挑战性。
光学清除技术（例如CLARITY，iDISCO + ，uDISCO和CUBIC）的开发使得能够对完整组织中的各种细胞结构进行3D成像。
特别是，最近已经实现了小鼠骨骼的3D荧光成像。例如，uDISCO可视化股骨中由EGFP遗传标记的Cx3cr1阳性细胞; Bone CLARITY在Sox9CreER中成像tdTomato标记的骨祖细胞; Rosa26-LSL-tdTomato在小鼠中标记骨细胞。然而，这些方法完全依赖于荧光标记，它们的一般实施可能受到以下几个因素的限制：（1）缺乏可用的基因荧光标记方法; （2）研究需要同时成像两种或多种不同的细胞结构; （3）繁殖小鼠系以整合多个遗传等位基因的时间和成本。因此，
非常需要用于检测完整骨中的内源表位并且同时与3D荧光成像的光学清除相容的全组织免疫标记程序，但尚未成功尝试。
对于该研究，
报道了一种新的BoneClear方法，用于在成年小鼠的完整，未切割的骨组织中对不同细胞结构的免疫标记。
经过BoneClear处理后，
完整的股骨几乎变得透明
，值得注意的是，uDISCO导致组织收缩，BoneClear（以及iDISCO +）没有引起股骨组织大小的这种变化；接下来，
研究人员将BoneClear与已发表的全组织免疫标记方法和预期细胞结构的3D成像进行了比较，发现BoneClear方法更优
。这些结果证明了BoneClear相对于报道的完整小鼠骨骼的全组织免疫标记和3D成像方法的优势。
BoneClear可以对小鼠骨骼中不同的细胞结构进行免疫标记。
例如，PECAM1（血管内皮细胞的特异性标记物）的免疫标记揭示了股骨内的血管网络。此外，
BoneClear可以处理未切割的小鼠脊柱
。为了展示这种新的BoneClear方法的应用，
研究人员们详细评估了骨内交感神经支配
：结果证明了BoneClear对小鼠骨骼中神经解剖学和病理学三维成像的强度。为了进一步证明其成像能力，
将BoneClear应用于成年小鼠完整，未切割的后爪
。全组织PGP9.5免疫标记揭示了后爪中惊人的全部神经支配。
这些结果已经展示了BoneClear在小鼠肢体中用于神经解剖学和病理学的3D成像的应用。
总而言之，
该研究开发了一种新的BoneClear方法，以实现完整小鼠骨组织中不同细胞结构的稳健的全组织免疫标记和3D成像。
这项技术进步有望在未来的观察中能为不同的研究领域服务。
参考消息：
https://www.nature.com/articles/s41422-019-0217-9
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