2017
年9月15-17日 周五-周日14日报到
(
理论与实验相结合)
参会学员免费获得一份
CRISPR/Cas9
三合一对照质粒
赵庆顺
南京大学模式动物研究所
遗传学与发育生物学教授
学士（
1983-1987
年，南京大学）、硕士（
1987-1990
年，南京大学）
博士（
1996-2001
，普渡大学）
2001-2003
年在杜克大学医学中心进行博士后训练
2003
年全职加入南京大学模式动物研究，
2006
年晋升为教授
往期学员评价
评价一：
CRISPR/Cas9
系统是一种新兴的基因定点编辑技术，越来越被研究者所关注。在赵庆顺教授理论结合实际、幽默接地气的授课方式下，为期两天半的培训轻松且充实，让我从对
CRISPR/Cas9
技术的毫无所知，到对该技术原理及应用有了的全面认识；同时，结合开展的实验环节，掌握了
CRISPR
序列的设计，基因组编辑工具的制备及向细胞内递送的方法；熟悉了利用
CRISPR
技术在动植物中敲入和敲除的过程；了解了
CRISPR/Cas9
脱靶问题解决方案。通过本次学习，受益匪浅！
评价二：有幸全程聆听赵教授的课，教授授课逻辑性非常强、条理清晰、讲解生动细致、内容丰富。教授知识面很广、知无不答言无不尽，绝对是个专业的研究学者。特别是对哪些技巧和注意哪些关键点讲的非常实用。比较适合从事动物植物细菌等微生物研究人员来学习。课程安排合理，由浅入深，适合不同人群，希望这个班能让更多的科研人员获益。
评价三：我是
2016
年在上海参加过赵教授的学习班，因我基础比较差，在实际应用过程中遇到了很多的问题，非常感谢南京尧顺禹生物科技有限公司工作人用耐心细致的课后服务。
2017
年
2
月主办单位上海玮瑜生物科技有限公司谢老师告知我老学员可以终身免费继续学习，我又去了一次南京。真是每一次都有不同的收获，感谢感谢再感谢，也祝玮瑜公司越办越好。
本期课程安排
第一天
上午9:00-12:00
第一讲、基因组靶向修饰技术简介
1
、基因组靶向修饰技术发展简史
2
、基因组编辑技术的工作原理
3
、第一代基因组编辑技术
ZFN 4
、第二代基因组编辑技术
TALEN 5
、第三代基因组编辑技术
CRISPR/Cas9
第二讲、CRISPR的设计
1
、
CRISPR
设计的依据及原则
2
、常用
CRISPR
设计软件简介
3
、
CRISPR
的在线设计演练
4
、靶向编辑基因的基因型确认（目标基因扩增引物设计策略）及
CRISPR
的再设计
第一天
下午13:00-17:00
第三讲、CRISPR/Cas9基因组编辑工具的制备及向细胞内的递送策略
1、DNA
形式的基因组编辑工具的制备与递送
2
、
RNA
形式的基因组编辑工具制备及递送
3
、
RNP
形式的基因编辑工具的制备与递送
实验一： CRISPR/Cas9 基因组编辑工具All-in-One表达质粒的构建（1）
CRISPR
模板的制备
第四讲、sgRNA活性验证
1、
体外法
2
、体内法
2.1
插入缺失（
Indel
）突变检测的基本策略
2.2
基于胚胎反应器的活性验证方法
2.3
基于细胞系的活性验证方法
实验二： CRISPR/Cas9 基因组编辑工具All-in-One表达质粒的构建（2）
CRISPR
模板与线性化
All-in-One
载体的重组、
转化、
携带基因组编辑工具的转化子的培养
实验三：sgRNA活性体外验证（1）
酶切反应的建立
第二天
上午9:00-12:00
第五讲、利用CRISPR技术创建基因组编辑细胞系
1、
基因敲入（如点突变和报告基因等）的供体设计原则及实例分析
2
、基因组编辑工具导入细胞系的方法（转染与转导）
3
、基因组编辑细胞系的筛选及基因型的快速确认
4
、敲入和
/
或敲除基因的功能确认策略
实验四：CRISPR/Cas9 基因组编辑工具All-in-One表达质粒的构建（3）
阳性转化子的快速验证法（
PCR
法）
实验五：基因组编辑突变体子的基因型鉴定（1）
基因组
DNA
模板的快速制备、目标基因组
DNA
片段的
PCR
扩增
第二天
下午13:00-17:00
第六讲、利用CRISPR技术创建基因敲除或敲入动物突变体
1
、
RNA
或
RNP
基因组编辑工具（和供体）递送至受精卵
2
、初建者（
F0
）体细胞携带靶向突变等位基因的确认
3
、基因组编辑突变体（
F1
）的筛选
4
、建系（
F2
）
5
、基因敲除
/
敲入的功能确认策略
第七讲、利用CRISPR技术创建基因敲除或敲入植物、真菌 和 细菌突变体
1
、基因组编辑工具的制作 2、基因组编辑工具的递送 3
、基因组编辑突变体
（F1）的
的筛选
4
、建系（
F2
）
5
、基因敲除
/
敲入的功能确认
实验六：CRISPR/Cas9 基因组编辑工具All-in-One表达质粒的构建（3）
电泳确认
实验七：sgRNA活性体外验证（2）
电泳观测sgRNA活性实验结果
实验八：基因组编辑子等位基因的基因型鉴定（2）
电泳识别基因组编辑突变体
第三天
上午9:00-12:00（12:00以后课程结束）
第八讲、基因组编辑技术的脱靶问题
