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实验室微生物菌种分离方法!

FDA食安云  · 公众号  ·  · 2024-07-27 06:00

正文

纯种分离



从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。在分子生物学的研究及应用中,不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物,而且还必须随时注意保持微生物纯培养物的“纯洁”,防止其他微生物的混入。

纯种分离的目的是将目的菌从混杂的微生物中分离出来,获得纯培养。

如果样品没有经增殖培养而直接进行分离,那么要得到具有某一特性的纯种,就更该细致、谨慎的操作。




纯种分离的常用方法有4种



倾注平板分离法、涂布平板分离法、平板划线分离法和组织分离法。



PART 0 1
倾注平板分离法:在培养基内部及表面形成单菌落

倾注平板法:将无自生理盐水稀释后的样品加入无茵培养基混合均匀。待凝固后倒置培养,内部及表面形成单自落。


PART 0 2
涂布平板分离法:在培养基表面形成单菌落

因为将微生物悬液先加到较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡,且采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长,因此在微生物学研究中常用的纯种分离方法是涂布平板法。

用途:一般多用于菌种的纯化;

优点:可以观察菌落特征,对混合菌进行分离;

缺点:不能计数;

控制每个平板中微生物的菌落数在一定的范围可获得理想的分离效果,对于细菌和酵母,以每平板10~200菌落为佳,对于 丝状菌 ,则应控制每平板菌落数30~50或更少。


如果分离菌丝呈蔓延性生长的丝状菌如根霉、 毛霉 等,则可以在培养基中添加0.1%左右的去氧胆酸钠(去氧胆酸钠在低PH下灭菌过程中易形成絮状沉淀,可以通过分别灭菌、倾注平板前混合的方法避免)或山梨糖(在 察氏培养基 中加山梨糖0.1%,蔗糖0.01%),这样可防止菌丝蔓延,便于挑取。


PART 0 3
平板划线分离法:能达到纯种分离的目的

经培养后会得到呈分散状态的单菌落纯培养。







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