间充质干细胞移植治疗糖尿病性角膜上皮迟发性愈合

糖尿病患者发生眼部并发 症的风险极高，除了糖尿病视网膜病变、糖尿病性白内障外，还包括一些眼表疾病如角膜知觉损害、浅层点状角膜炎、角膜上皮损伤愈合延迟等。角膜上皮愈合不良容易诱发角膜溃疡、基质浑浊以及细菌性角膜炎，对视力造成永久损害。尽管目前已研发多种药物治疗上皮延迟性愈合，如自体血清、神经营养因子，但是对于复杂的病症仍旧没有有效的治疗方法。近期研究发现糖尿病性角膜病的发生与慢性炎症密切相关，在伤口周围可发现大量的凋亡细胞和促炎因子，伴随着 功能失调的巨噬细胞。慢性低 度炎症以及间质金属蛋白酶（MMPs）表达失衡都会引起微环境异常，从而损害了角膜缘干细胞导致上皮愈合不良。 间充质干细胞（MSCs）具有多分化和自我更新能力，此外也可通过调控周围组织和免疫细胞而修复伤口，营造促再生和抗炎的微环境。 MSCs 可分泌TNF-α 刺激基因/ 蛋白-6（TSG-6），这是一种多功能的、具有抗炎作用的蛋白，已在多种眼疾病模型上发现其显著的治疗效果。

来自山东省眼科研究所的 谢立信教授团队想要验证MSCs是否通过分泌TSG-6 对糖尿病性角膜伤口修复起促进作用，他们在糖尿病小鼠模型上结膜下注射BM-MSCs 或重组TSG-6，然后通过荧光染色评估角膜上皮愈合情况， 用定量RTPCR和Western blot 测量TSG-6水平。用流式分析仪和免疫荧光染色分析白细胞和巨噬细胞的浸润情况。此外，敲减助TSG-6 转染的shRNA（short hairpin RNA）并进一步在离体培养的角膜缘上皮干/ 祖细胞、巨噬细胞和糖尿病小鼠上评估治疗效果。

结果发现MSC局部移植可以显著促进角膜上皮愈合，伴有角膜TSG-6 表达上调、角膜上皮细胞增殖、炎症反应减弱。 在培养的人类角膜缘上皮干/ 祖细胞中TSG-6 增加了集落生成效率和细胞增殖速度，上调了ΔNp63 的表达。在糖尿病小鼠角膜和巨噬细胞培养皿中，TSG-6 缓解了白细胞浸润，促进了巨噬细胞向抗炎的M2 型转化。此外，敲减了TSG-6 的shRNA 后这效应就被明显减弱。