在当下的免疫学研究领域，巨噬细胞的极化机制已然成为了热点，吸引着众多科研人员的目光。夏老师在 PubMed 冲浪时，就看到了一篇由上海交通大学医学院免疫研究所发表于影响因子 10.3分 的《Journal for Immunotherapy of Cancer》期刊上的文章，他做的是巨噬细胞的极化重置，还挺有意思的（
一篇文章是不是做得有意思，就在于这篇文章是不是通过合理的假设和严谨的逻辑推理，推进课题，在验证的过程中，是不是还符合逻辑，证据链是否完善，不清楚科研的逻辑的话，可以去看看《科研的推理和逻辑：从实验台到咖啡桌》和《信号通路是什么鬼？》系列
）。
肿瘤微环境中，巨噬细胞的浸润是一个常见现象，这些浸润的巨噬细胞被称为肿瘤相关巨噬细胞（TAM）。通常情况下，TAM 呈现出 M2 极化状态，这种极化倾向于免疫抑制，对肿瘤的生长和发展起到一定的促进作用。长春碱（VBL）作为一种靶向微管解聚的抗肿瘤药物，研究人员发现，VBL 能够促使 TAM 从 M2 极化状态向 M1 极化状态转变，从而激发强大的抗肿瘤效应。于是他们提出了一个假设，假设
微管靶向药物能够影响微环境中巨噬细胞的极化重置（
提出假设是一篇文章中的关键，通过已知的结果以及已有的研究，经过总结，提出一个可证伪的问题，这就是假设，假设和假设的迭代推动了整篇文章乃至课题的推进，不清楚假设和假设迭代的话，可以去看看《科研的推理和逻辑：从实验台到咖啡桌》、《列文虎克读文献》和《信号通路是什么鬼？》系列
）
为了进一步验证这一发现，研究团队选用了三种微管靶向药物 ——VBL、秋水仙碱和紫杉醇进行对比实验。结果显示，这三种药物均能使巨噬细胞的 M1 极化程度有所增加，同时抑制 M2 极化。
然而，在这三种药物中，唯有 VBL 能够显著促进 CD8+ T 细胞的增殖，并有效逆转 TAM 的免疫抑制作用。深入研究发现，VBL 处理后 CD8+ T 细胞的增殖，是通过 M1 极化的巨噬细胞介导实现的。但这里存在一个疑问：这种增殖是由巨噬细胞与 CD8+ T 细胞直接接触，通过配体 - 受体结合引发的，还是巨噬细胞激活后，通过分泌途径间接激活 CD8+ T 细胞的增殖呢？为了解答这一问题，研究人员分别进行了直接接触共培养和 Transwell 共培养实验。结果表明，两种共培养体系中，由 VBL 诱导重编程激活的 M1 巨噬细胞，均能有效地促进 CD8+ T 细胞的增殖。
既然 VBL 对 CD8+ T 细胞和巨噬细胞的 M1 极化有着显著影响，那么 VBL 的抗肿瘤作用是否正是通过这两者实现的呢？为了验证这一假设，研究人员在 VBL 处理后，使用了抗 CSF1R 和抗 CD8 两种抗体，分别耗竭巨噬细胞和 CD8+T 细胞（
这一实验设计也遵循了柯霍氏法则，通过抑制巨噬细胞和CD8+ T细胞，旨在明确 VBL 发挥作用的具体途径。若对柯霍氏法则不甚了解，可以看下《科研的推理和逻辑：从实验台到咖啡桌》和《轻松的文献导读》
）。实验结果显示，巨噬细胞和 CD8+T 细胞的耗竭，均降低了 VBL 在 MC38 结直肠肿瘤中的抗肿瘤功效（见下图红框部分）。这一结果有力地表明，巨噬细胞和 CD8+ T 细胞在 VBL 介导的免疫治疗中均发挥着不可或缺的作用。
抗 PD1 免疫治疗在临床上应用广泛，其原理是通过使用抗 PD1 或抗 PD-L1 抗体，增强 CD8+ T 细胞对肿瘤细胞的杀伤能力。然而，在肠癌治疗中，抗 PD1 单药治疗的效果并不理想。基于此，研究团队尝试将 VBL 与抗 PD1 联合使用。令人欣喜的是，实验结果表明，VBL 联合抗 PD1 治疗能够显著增强免疫治疗的疗效，为肠癌治疗提供了新的思路和方法。
那么，VBL 究竟是通过何种分子机制实现巨噬细胞的重新极化（Repolarize）的呢？为了探寻这一问题的答案，研究人员进行了二代测序分析。通过对测序数据的富集分析，他们发现，使用 VBL 后，ERK 相关的通路表达显著增强，同时 NFκB 信号通路也受到了明显的影响（
ERK 主要影响 MAPK 信号通路，而 NFκB 信号通路在细胞免疫调节中发挥着关键作用，这两个信号通路在炎症反应和免疫调节中，都是比较常见的。若对这两条信号通路的具体内容不太熟悉，可查阅《信号通路是什么鬼？》系列中的相关章节进行复习
）。
NFκB 作为一种在巨噬细胞免疫反应中起关键作用的转录因子，无论是在体外还是体内实验中，都展现出了重要的调控功能。与此同时，研究人员还发现，VBL 处理后，ROS 生物合成途径的调控被激活，其中 Cyba 基因的表达变化尤为关键。这一发现暗示着 VBL 可能通过影响巨噬细胞的 ROS 产生，进而调节细胞的极化状态。为了验证这一猜想，研究人员使用乙酰半胱氨酸（NAC）耗尽细胞内的 ROS（
在铁死亡和铜死亡的研究中，NAC 常用于清除 ROS。如果熟悉铜死亡和铁死亡的话，应该对此方法有一定的了解，不熟悉的话，可以去参考《信号通路是什么鬼？》系列中的相关章节进行复习
）。实验结果显示，在 VBL 处理后，耗尽 ROS 会明显抑制巨噬细胞的 M1 极化，进一步证实了 ROS 在 VBL 诱导的巨噬细胞极化过程中的重要作用。
既然 VBL 能够诱使 ROS 水平升高，那么这一变化又会带来怎样的生物学效应呢？研究人员通过 RNA-Seq 分析发现，VBL 处理后，溶酶体生物发生通路显著上调。已有研究表明，ROS 可以通过调节核 TFEB（转录因子 EB）的核易位，诱导自噬和溶酶体生物发生。为了验证这一机制，研究人员进行了荧光染色实验，结果显示 VBL 的确能够增加溶酶体的生成，同时激活 TFEB 的表达。而当使用 NAC 清除 ROS 后，这些表型均受到抑制（
这一实验同样遵循柯霍氏法则，旨在明确 VBL 是通过 ROS 诱导 TFEB 促进溶酶体生成的具体机制，但在这里，直接清除ROS，其实会犯下肯定后件的逻辑谬误，在逻辑上并不能算是十分严谨，不清楚的话，可以去看看《科研的推理和逻辑：从实验台到咖啡桌》、《列文虎克读文献》和《信号通路是什么鬼？》系列
）。
溶酶体与细胞的吞噬能力密切相关，当溶酶体降解功能出现缺陷时，细胞的吞噬能力会显著减弱。基于此，研究人员推测，VBL 增强溶酶体的生成，可能会激活细胞的吞噬能力。为了验证这一推测，他们检测了 VBL 对巨噬细胞吞噬能力的影响。实验结果显示，经 VBL 处理的巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬作用显著增强，而经典激活的 M1 巨噬细胞（由 LPS + IFNγ 诱导）却并未表现出类似的吞噬能力增强现象。进一步研究发现，这种吞噬作用可以被 NAc 和羟氯喹（HCQ）抑制（
羟氯喹是一种常见的自噬抑制剂，主要作用是抑制溶酶体和自噬体的结合，从而抑制溶酶体功能。若对其作用机制不太了解，可查阅《信号通路是什么鬼？》系列中关于自噬的相关章节进行学习
）。这一结果表明，ROS 和溶酶体活化在 VBL 诱导的巨噬细胞吞噬作用中发挥着关键作用。
综上所述，本研究揭示了一个全新的分子机制：在肿瘤微环境中，TAM 中的 M2 巨噬细胞在 VBL 的作用下，NFκB 信号通路受到调控，从而促进 M1 巨噬细胞的极化。同时，NFκB 信号通路的激活，促使 Cyba 表达上调，进而促进 ROS 的产生。ROS 生成后，通过激活 TFEB，诱导溶酶体生物生成，最终增强了巨噬细胞的吞噬作用。VBL 对巨噬细胞的 M1 重极化过程起到了关键的调控作用，而 VBL 诱导的 M1 极化巨噬细胞，能够进一步增强 CD8+ T 细胞的增殖，有效抑制肿瘤的生长。此外，VBL 与抗 PD1 联合治疗，能够显著提升肿瘤免疫治疗的效果，为临床肿瘤治疗提供了新的策略和理论依据。
这篇文章内容丰富，实验设计相对来说还算是较为严谨，但在逻辑连贯性上仍有一定的提升空间。如果每一个实验步骤都能更加紧密地衔接，形成一个完整的逻辑链条，或许能够冲击更高影响因子的期刊。例如，VBL 诱导的 M1 巨噬细胞重编程与经典 M1 巨噬细胞诱导方式之间的差异，这一问题值得深入探讨。对于这篇文章的验证过程和研究结论，大家有什么看法呢？欢迎在评论区留言分享，夏老师期待与大家共同交流探讨。今天的分享就到这里，感兴趣的读者可以查阅原文，希望大家都能在科研的道路上不断探索，心明眼亮。
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