【flowjo】流式笔记：中性粒细胞发育追踪

肿瘤中性粒细胞固然是火，但要是只知其然，不知其所以然，那很多数据（中性粒细胞的异质性）可能就会出现解释不清的情况。我们今天就对中性粒细胞从骨髓发育到释放入血的整个流式检测进行一个梳理吧~

Ng LG, Liu Z, Kwok I, Ginhoux F. Origin and Heterogeneity of Tissue Myeloid Cells: A Focus on GMP-Derived Monocytes and Neutrophils. Annu Rev Immunol. 2023;41:375-404.

树状图能够很清晰地看到中性粒的来龙去脉：

接下来我们开始从HSC开始设门找到每一阶段的细胞群体：

HSC

谢嘉怡, 王瑨, 赵萌. (2019). 小鼠骨髓造血干细胞流式分析. Bio-101: e1010339. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010339.

小鼠造血干细胞分析流式图示例。首先以 FSC-A 和 SSC-A 为轴,画出主要细胞群；

然后以 FSC-A 和 FSC-H 去除粘连细胞,画出单个细胞群；

再画出Lin-细胞群,一般占单个细胞群的10%；

然后画出Sca1+cKit+细胞群 (LSK, Lin-Sca1+cKit+)。

接下来可根据实验需要划出：

• CD150+CD48- (CD150HSC)
• CD34-CD135- (LT-HSC)
• CD34+CD135- (ST-HSC)
• CD34+CD135+ (MPP)

关于ST-HSC和LT-HSC的标记，CD135也并非是必要条件，因为在2024年Leukemia杂志的文章中，作者设门的方式如下：

此时可以看到ST-HSC和LT-HSC还有两个MPP亚群能够被CD150和CD48很好的分开。

Chatain N, Baumeister J, Szymanski de Toledo MA, et al. Asciminib antagonizes transplantable BCR::ABL1-positive lymphoid blast crisis in vivo by targeting malignant stem cells. Leukemia. 2024;38(8):1825-1830.

MPP

关于MPP的几个亚群，目前还尚未有公论，2021年Blood的一篇文章发现其有6个亚群，较为齐全：

Sommerkamp P, Romero-Mulero MC, Narr A, et al. Mouse multipotent progenitor 5 cells are located at the interphase between hematopoietic stem and progenitor cells. Blood. 2021;137(23):3218-3224.

GMP

接下来是GMP和proNeu：

用的抗体极尽齐全，可以借鉴，但是考虑到实际实验中经费和荧光通道的问题，可以适当精简。

1. proNeu1 ：(Lin/CD115/Flt3)-cKithiCD16/32hiLy6C+CD34hiCD11bloCD106-,
2. proNeu2 ：(Lin/CD115/Flt3)-cKithiCD16/ 32hiLy6C+CD34hiCD11bhiCD106+
3. preNeus ：(Lin/CD115/Siglec-F)-Gr1+CD11b+CXCR4h ickitintCXCR2-
4. CMPs ：Lin-cKit+Sca-1-CD16/32intCD34int
5. GMPs ：Lin-cKit+Sca-1-CD16/32hiCD34hi
6. MDPs ：Lin-cKit+Sca-1-CD115+Flt3+Ly6C-
7. cMoPs ：Lin-cKit+Sca-1-CD115+CD81-Flt3-Ly6C+

Kwok I, Becht E, Xia Y, et al. Combinatorial Single-Cell Analyses of Granulocyte-Monocyte Progenitor Heterogeneity Reveals an Early Uni-potent Neutrophil Progenitor. Immunity. 2020;53(2):303-318.e5. doi:10.1016/j.immuni.2020.06.005

Neu

最后是pre到mat的部分：

1. preNeu ：(Lin,CD115,Siglec-F)-Gr1+CD11b+CXCR4hickitintCXCR2-
2. immature Neu ：(Lin,CD115,Siglec-F)Gr1+CD11b+CXCR4locKitloCXCR2-
3. mature Neu ：(Lin,CD115,Siglec-F)-Gr1+CD11b+CXCR4-cKit-Ly6G+CXCR2+

Evrard M, Kwok IWH, Chong SZ, et al. Developmental Analysis of Bone Marrow Neutrophils Reveals Populations Specialized in Expansion, Trafficking, and Effector Functions. Immunity. 2018;48(2):364-379.e8. doi:10.1016/j.immuni.2018.02.002

以上基本上就能够覆盖中性粒细胞发育的完全阶段啦~