IF=5.7分干湿结合的文章|聚焦肿瘤相关成纤维细胞（CAF）上，可复现！

i生信 · 公众号 · · 2025-03-05 11:19

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今天小编带大家解读一篇25年1月份5分+研究范文。2025年1月，International journal of cancer（IF=5.7）在线发表题为“FHL2 expression by cancer-associated fibroblasts promotes metastasis and angiogenesis in lung adenocarcinoma”的研究论文。这篇文章的核心内容是研究癌症相关成纤维细胞（CAFs）中FHL2蛋白的表达对肺癌腺癌转移和血管生成的影响。研究结合了“干实验”（生物信息学分析）和“湿实验”（实验生物学验证），揭示了FHL2在肺癌进展中的重要作用。

一、研究背景

肺癌是全球最常见的恶性肿瘤之一，其中腺癌是最主要的组织学亚型。尽管目前有多种治疗手段，但晚期肺癌患者的预后仍然较差。肿瘤微环境（TME）在肿瘤进展中起着重要作用，其中CAFs是最丰富的细胞类型之一。CAFs通过分泌细胞因子、趋化因子和生长因子等促进肿瘤的进展。FHL2是一种LIM结构域蛋白，参与细胞黏附和信号传导，其在多种肿瘤中的表达与恶性表型相关，但在肺癌中的作用尚不清楚。

二、研究方法

1.单细胞RNA测序分析：研究者使用GEO数据库中的单细胞RNA测序数据集（GSE131907），通过Seurat软件进行数据标准化和缩放，并使用scCustomize软件包进行可视化。他们分析了FHL2在肺癌组织中的表达情况，并将其与正常肺组织进行比较。

2. 免疫组化分析：对115例肺癌腺癌患者的手术切除标本进行免疫组化染色，检测FHL2和CD34的表达。通过H&E染色确定肿瘤和基质区域，并对FHL2的表达进行评分。

3. 细胞培养和基因敲除：使用CRISPR/Cas9技术建立了FHL2基因敲除的CAFs细胞系（CAF094YFPhTERT FHL2KO），并通过Western blot验证了FHL2的敲除效率。

4. 动物实验：通过将人肺癌腺癌细胞（A110L）与野生型或FHL2敲除的CAFs共注射到SCID小鼠的左肺中，建立原位肺癌模型，评估FHL2敲除对肿瘤转移的影响。

5. 体外实验：进行了CAFs诱导的肺癌细胞迁移和侵袭实验，以及血管内皮细胞管状形成实验，评估FHL2敲除对这些过程的影响。

6. 临床样本分析：对115例肺癌腺癌患者的临床样本进行分析，评估基质FHL2表达与微血管密度和预后的关系。

三、研究结果

1. FHL2在肺癌组织中的表达：单细胞RNA测序显示FHL2在肺癌组织中的成纤维细胞中高表达，尤其是在肌成纤维细胞中。此外，FHL2在早期肺癌组织中的表达高于正常肺组织，表明FHL2的上调是成纤维细胞向CAFs转化的早期事件。

2. FHL2对CAFs增殖的影响：通过siRNA敲低FHL2可以显著减少CAFs的增殖，而CRISPR/Cas9介导的FHL2敲除则没有显著影响CAFs的增殖，这可能与长期缺乏FHL2时的代偿机制有关。

3. FHL2对肺癌细胞迁移和侵袭的影响：FHL2敲除的CAFs显著减少了对肺癌细胞A110L和H23的迁移和侵袭能力。

4. FHL2对肺癌转移的影响：在原位肺癌模型中，与野生型CAFs共注射的A110L细胞显示出较高的肺转移率，而与FHL2敲除的CAFs共注射的A110L细胞转移率显著降低。

5. FHL2对血管生成的影响：FHL2敲除的CAFs培养基显著减少了内皮细胞管状结构的形成，表明FHL2在CAFs中促进了血管生成。

6. 临床样本分析：在115例肺癌腺癌患者的样本中，基质FHL2的阳性表达与较高的微血管密度和较差的预后相关。此外，基质FHL2的表达与肿瘤侵袭性和淋巴结转移的频率增加有关。

四、文章图

Figure 1. FHL2 is highly expressed in lung cancer tissue and is a myofibroblast marker as demonstrated by using a previously published single-cell RNA-sequencing dataset.

Figure 2 Knock-down of FHL2 in CAF reduces proliferation of CAFs and establishment of FHL2 KO CAFs and TGF-β1 upregulate FHL2 expression on CAF and characteristics of FHL2 KO CAFs.

Figure 3 FHL2 KO on CAFs decreases CAF-induced migration and invasion of human lung adenocarcinoma cells in vitro and metastasis in an orthotopic lung cancer model.

Figure 4 FHL2 KO in CAFs reduces CAF-induced tube formation of MS1 cells and relationship of microvascular density and stromal FHL2 expression in clinical tumor samples.

Figure 5 FHL2 KO in CAFs reduces OPN secretion from CAF and knock-down of OPN in CAF or antibody blocking of OPN reduces CAF induced migration of A110L.

Figure 6 Gene expression signature analysis and comparisons to common lung adenocarcinoma driver alterations.

Figure7 Expression and significance of FHL2 in clinical tumor samples.

五、总结

FHL2在肺癌CAFs中高表达，并通过促进血管生成和转移来增强肺癌腺癌的进展。这些发现为肺癌治疗提供了新的潜在靶点。

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