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用数据说话：四大案例都认可的基因编辑强大助手，你了解过吗？

BioArt · 公众号 · 生物 · 2024-11-20 08:33

正文

你还在为细胞转染稳定性差、原代细胞转染效率低、以及敏感细胞转染后存活率低而苦恼吗？

Lonza的Nucleofector™转染技术将会为你扫清障碍，实现稳定且低毒性的高效转染。

你还在为批量筛选关键基因和靶点劳神费力吗？

Lonza最新一代的4D-Nucleofector™ Technology以及384-well Nucleofector™将会解放你的双手，在几分钟内帮你实现96乃至384个通量的高效转染和筛选。

Nucleofector™技术是一种基于通过施加电脉冲在细胞膜中瞬间产生小孔，综合各种Nucleofector™程序和细胞类型特异性电转试剂，使核酸底物输送到细胞质，甚至可以通过核膜进入细胞核，使得细胞最高转染效率可达99%，并使转染效率不依赖于细胞的增殖分裂。最新升级的4D-Nucleofector™ Technology和384-well Nucleofector™更是集多种转染方式于一身，具有强大兼容性和高通量性，全面满足各种转染需求。

▲ 具兼容性的模块:

Nucleofector™ X模块

▲ 贴壁转染模块:

4D-Nucleofector™ Y模块

▲ 中通量：

4D-Nucleofector™ 96孔模块

▲ 大体积转染：

4D-Nucleofector™ LV模块

4D-Nucleofector™ Technology系统是一种4位一体的模块化系统，其最基本的功能模块包括Core模块、X模块–悬浮转染模块，同时可根据自身需求灵活叠加Y模块–贴壁转染模块、96孔-中通量转染模块、以及LV模块-大规模转染模块。

其中，X模块可利用2个100μl电极杯和20μl 16孔板条快速转染10⁴-10⁷个悬浮细胞。Y模块可以实现贴壁细胞的直接转染，有效克服敏感细胞的转染障碍，更好的保护细胞功能。96孔模块可以为一系列原代细胞和细胞系提供灵活的通量，作为有效的筛选工具。同时，每块板最多可运行96个独立程序，在5分钟内自动处理，适用于便捷地优化核转染条件。LV模块则依赖其封闭系统，大容量核流动性等特点实现大规模转染，为CAR-T等细胞疗法提供了有力的技术保障。

384-well Nucleofector™系统是一个独立的平台，由产生高压脉冲的电源单，带有电动转盘的板处理单元，和直观的基于PC的操作软件组成，可轻松对384-well Nucleofection实验进行参数设置，实现384孔的高通量核转染。该平台可在一分钟内处理384个孔，转染细胞量可低至2x10⁴个细胞，并且384孔中的每一个都可以独立进行条件设置，是筛选应用的绝佳工具。

▲ 高通量转染模块:

384孔 Nucleofector™系统

用数据说话

自2001年上市起，Lonza Nucleofector™已有二十多年历史，不断优化升级的Nucleofector™技术受到了客户的广泛认可。据不完全统计，借力Lonza Nucleofector™的文章多达数万篇，其中不乏发表于Nature,Science,Cell,Nature medicine,Nature cell biology,Cell stem cell等高水平期刊的佳作。应用Nucleofector™技术转染的细胞类型包括人源NK细胞，T细胞、iPSC、B细胞，鼠源T细胞、肝细胞、内皮细胞、成纤维细胞、肌肉干细胞等数百种细胞类型。此外，Lonza全球开放并长期更新的数据库 (https://knowledge.lonza.com/)更是包含了超700种细胞类型的转染信息，并为上百种常用细胞类型提供详细的实验方案。

用案例举证

新一代的96孔和384孔的Nucleofector™系统，更是为中高通量筛选提供了革命性的技术支撑。中高通量的技术平台为探究发育、疾病、肿瘤、病毒侵染等发生发展，筛选不同生物进程中的关键调控因子，以及药物靶点的筛查等生命科学的关键领域创造了无限可能。

案例一

2020年，美国加州大学Nevan J. Krogan团队联合来自英国，法国和德国的科学家在顶级学术研究型期刊Science上发表了题为 "Comparative host-coronavirus protein interaction networks reveal pan-viral disease mechanisms"利用Lonza的转染试剂SF Buffer(Lonza V5SC-2002)和Lonza的HT 384-well nucleofector(Lonza, #AAU-1001)并结合 CRISPR 基因敲除系统在Caco-2细胞中成功筛选出SARS-CoV-2侵染宿主细胞并在宿主细胞中互作而得以存活的因子^[1]。为解密SARS-CoV如何侵染宿主细胞提供了重要依据，同时为防治和治疗SARS-CoV提供了坚实的理论基础。

案例二

同年，来自丹麦哥本哈根大学的Petra Hamerlik团队在高水平期刊Nature communication上发表了题为"SPT6-driven error-free DNA repair safeguards genomic stability of glioblastoma cancer stem-like cells"应用384-well Nucleofector™系统和P3 Nucleofector™ Solution(Lonza)转染试剂在胶质母细胞瘤干细胞样细胞系(Glioblastoma cancer stem-like cells: GBM)中进行了多达296个基因的siRNA干扰实验，在数百个调控染色体结构的基因中筛查出SPT6是GBM中基因组稳定性的重要调节因子^[2]。

案例三

肝脏纤维化是肝硬化等疾病发生发展过程中的一个重要环节，因此，探究肝脏纤维化的形成机制至关重要。2022年，Takeda Development Center的Shan Yu团队在ACS Chem. Biol.上发表了题为 "Genome-wide CRISPR Screening to Identify Drivers of TGF-β Induced Liver Fibrosis in Human Hepatic Stellate Cells"，主要应用了Lonza的Nucleofector™技术，分别使用了Nucleofector™ X模块和384-well Nucleofector™，在人源的肝脏星状细胞中转染CRISPR系统，筛选出了多个介导TGF- β信号通路调控纤维化进程的因子^[3]。

案例四

2023年，阿斯利康旗下的科学家Davide Gianni等人在SLAS Discovery上发表了题为 "Highly scalable arrayed CRISPR mediated gene silencing in primary lung small airway epithelial cells"的研究性和实验方法类文章，利用Lonza的Nucleofector™ 高通量转染技术探究原代肺小气道上皮细胞中疾病相关基因^[4]。该文章介绍了传统脂质体转染方式在原代细胞中的转染难度之大，大规模筛选之不便捷，同时详细介绍了如何使用和优化高通量Nucleofector™ 技术，便捷高效的实现科研目的。

可见，Nucleofector™ Technology是全方位满足各种转染需求的利器，是科研工作者转染无忧、高效筛选的重要法宝。此外，Lonza团队为了更好地服务中国用户，建立了集产品资料、应用教学以及最新资讯为一体的微信服务平台(Lonza Bioscience)，助力广大中国科研工作者进一步探究生命科学奥秘。

扫码了解更多Nucleofector™的信息，

11月21日最新webinar等你来注册！

主题

Arrayed CRISPR screening for phenotypic discovery at the MRC-AstraZeneca-University of Cambridge Joint Functional Genomics Screening Laboratory (FGSL)

内容

CRISPR screening as an unbiased approach to identify new targets for hypothesis generation.

Arrayed format facilitates dissection of complex phenotypes.

Non-viral delivery of CRISPR/Cas9 reagents such as through nucleofection enables arrayed screening in primary cells.

演讲者

Ulrike Künzel, PhD

FGSL Lead

AstraZeneca

Chun Hao Wong, PhD

FGSL Lead

Milner Therapeutics Institute

University of Cambridge

https://insidescientific.com/webinar/arrayed-crispr-screening-for-phenotypic-discovery-at-the-mrc-astrazeneca-ucam-functional-genomics-screening-laboratory-fgsl/?utm_bmcr_source=lzsocial

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*本文相关数据源于龙沙或第三方实验室的，供参考之用，具体数据将受实验环境影响。

[参考文献]

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1.Gordon, D.E., et al., Comparative host-coronavirus protein interaction networks reveal pan-viral disease mechanisms. Science, 2020. 370(6521).

2.Obara, E.A.A., et al., SPT6-driven error-free DNA repair safeguards genomic stability of glioblastoma cancer stem-like cells. Nat Commun, 2020. 11(1): p. 4709.

3.Yu, S., et al., Genome-wide CRISPR Screening to Identify Drivers of TGF-beta-Induced Liver Fibrosis in Human Hepatic Stellate Cells. ACS Chem Biol, 2022. 17(4): p. 918-929.

4.Dickson, A., et al., Highly scalable arrayed CRISPR mediated gene silencing in primary lung small airway epithelial cells. SLAS Discov, 2023. 28(2): p. 29-35.

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