RT-PCR、qPCR、Real-time PCR...迷之概念，傻傻的分不清楚？

说起PCR，不少人都知道它在寻疑追踪上是把好手，它能快速识破DNA的隐形伪装，让其在科研者面前无所遁形。因而，在科研打怪升级的路上，它可是一个必不可少的装备之一。即便如此，要想真正将该装备应用的得心应手，仍不是一件简单的事儿。总归是需要对PCR进行全方面的细致了解，毕竟知己知彼百战不殆嘛。

PCR，学名聚合酶链反应，心灵手巧的它最擅长做的就是织围巾将DNA分子套牢。换言之，就是在织围巾（PCR）的过程中，将几个元素织样（模板）、起针（引物对）、毛线（dNTP）和针（Taq酶以及缓冲液体系）串起来，让DNA分子无处可逃。

首先，在高温（95℃）时将织样拆解开（DNA双链解链），而后将已经织好的起针与织样相匹配（退火将已合成的引物与单链模板相结合），按照织样（模板），沿着起针（引物）用毛衣针（Taq酶）将毛线（dNTP）一针针连接上去（72℃延伸扩增）。

接着，通过对所有织样（包括原先的模板及新形成的模板）的拆解（解链）及新的起针（引物）搭配（结合）、编织（Taq酶扩增）这样循环n次后，围巾的数量就以2的n次方（产物量就以2的n次方）增多了。如此，狡猾的DNA分子就只能在不断重复的热变形—复性—延伸的过程中束手就擒了。

肿么样？！看起来是不是很简单呢？！可是仍有不少"脸盲患者"的生物狗表示对所谓的RT-PCR、qPCR、Real-time PCR、Realtime RT-PCR傻傻分不清，时常会犯迷糊。此时不要方，本文则将吹散PCR那团阴霾，让你拨开云雾见月明！

RT-PCR（特指反转录PCR）作为PCR的一种变形反应，通常会先将RNA逆转录为DNA，再依此通过PCR进行扩增，该法只能定性却不能定量。要论定量，在PCR领域中，qRCR称第二，谁又敢称第一呢！目前在科研界中将Real-time PCR缩写为 qPCR（quantitative real-time PCR），也成为一种约定俗称的事。

显而易见，real-time RT-PCR指的就是qPCR+RT-PCR的组合，即将 mRNA/总RNA 逆转录为 cDNA 后再作为模板进行实时荧光 PCR 分析。这一重磅组合常会与RNA-seq、芯片筛选等大腕明星强强联手，并在此后涅槃重生为发表高分文章的一块重要奠基石。

那么究竟qPCR身负何等绝技，引得一众科研者如此看重呢？其实相比于PCR简单织件"围巾"，qPCR因天生自带荧光（荧光染料嵌合法—SYBR Green I和荧光探针法—Taqman探针），可将这件围巾瞬间美化为"荧光衣"，使得荧光与DNA产物数目成正比，且与DNA初始量有一定相关性。

因此只需通过机器收集荧光量就能知道DNA初始量，那么以下三条曲线可谓是在DNA定量领域形成了三足鼎立之势：

1）扩增曲线

2）熔解曲线

3）标准曲线