作者 | NIRO
编辑 | 澹泊研究僧
来源 | NIRO（ID：NIRO-keyanmiao）
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在这两篇文章《
还别说用「乙醇」替代甲醇进行转膜，真是爽死了！
》和《
用乙醇替代「甲醇」的转膜液，配方体系原来是这样！
》中，提到乙醇可以代替甲醇进行转膜，这样就不用再闻那刺鼻的甲醇了，很多朋友为此刚到欣喜。同时也发出了疑问: 那乙醇可以代替甲醇润洗PVDF膜吗？
答案是可以的。为什么呢？
这期就给大家介绍为什么甲醇/乙醇可以浸泡PVDF膜，而NC膜就不用的原因。
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在WB实验中，每到转膜这一步骤，总要用甲醇对PVDF膜进行浸泡至少10s(也是就师兄师姐口中的
醒膜
)，那
为什么要醒膜呢
？
(1) 甲醇可以改变PVDF膜表面特性
PVDF膜在干燥状态下是疏水性的。预处理PVDF膜的目的是
增加其表面的亲水性
，使其能够更有效地吸附水溶液中的蛋白质，甲醇的分子会与膜表面的聚合物链相互作用，改变其表面特性。这种相互作用使膜的表面
从疏水性转变为更亲水性
，从而
有助于膜吸附水基介质中的蛋白质
。亲水性的增加使得蛋白质更容易接触并附着在膜上，这对于转膜过程中蛋白质的有效捕获至关重要。
(2) 活化PVDF膜表面
甲醇不仅帮助湿润PVDF膜，还能在一定程度上改变膜的表面特性，使其更适合蛋白质的吸附。这种活化步骤
有助于蛋白质更有效地从凝胶转移到膜上
。经过活化处理，
PVDF膜上的醛基可能转化为羧基
，形成类似于“锚”的结构，牢牢地固定住蛋白质，防止其在转膜过程中流失。
甲醇
具有去除PVDF膜表面可能存在的脂质和污垢的作用
，这些物质可能会干扰蛋白质的转印和后续的抗体检测。通过甲醇浸泡，可以确保膜表面更干净、更有效地转移蛋白质。
同时也可以
去除SDS的影响
。在SDS-PAGE后，蛋白质表面包裹着SDS分子。SDS赋予蛋白质负电荷，促使其在电泳过程中按大小分离。使用甲醇预处理PVDF膜时，甲醇可以帮助去除一些蛋白质表面的SDS。这是因为SDS是一种去污剂，能够与甲醇相互作用。
去除SDS后，蛋白质的部分水合层被移除，这使得蛋白质更容易与转移膜(如PVDF或硝酸纤维素膜)的表面直接接触，从而促进蛋白质在膜上的固定
。如果SDS没有被有效去除，蛋白质可能不会紧密地结合到膜上，影响后续的检测步骤。
甲醇的物理和化学特性可以影响PVDF膜的孔隙结构，使其孔隙暂时变小，有助于防止小分子量蛋白质在转膜过程中穿过膜而丢失。
甲醇可以使PVD(聚偏氟乙烯)膜的孔隙变小，原因在于甲醇的物理和化学特性。当PVDF膜与甲醇接触时，甲醇会与膜的聚合物相互作用，导致膜的孔隙结构发生变化。具体来说，
甲醇会使膜中的聚合物链之间的距离缩小，从而减小膜的孔隙尺寸
。这一变化对于蛋白质转膜过程非常重要，因为它
有助于防止小分子量的蛋白质在转膜过程中穿过膜而流失
，确保这些蛋白质有效地转移到膜上并固定
。
值得注意的是，使用
甲醇预处理PVDF膜时要适度，因为
过度的甲醇处理可能导致膜变得过于疏水
，反而妨碍蛋白质的吸附
。此外，
甲醇和乙醇都是极性有机溶剂
，具有相似的化学性质。它们都可以与PVDF膜表面的官能团发生反应，从而起到活化膜表面的作用。所以，在实际应用中，甲醇和乙醇的浸泡效果相差不大，因此可以根据实验条件和可用性选择使用其中一种。
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聊完了甲醇和乙醇对PVDF膜的处理原因，我们也简单的介绍一下NC膜(硝酸纤维素膜)吧。对于NC膜，通常不需要甲醇预处理，因为
NC膜
本身就具有较高的亲水性
。且NC膜的蛋白质结合主要依靠
疏水作用和氢键作用
，不需要额外的活化步骤，其孔径结构和化学性质使其天然具有高蛋白质结合能力。
如果用甲醇浸泡可能会影响NC膜的结构和蛋白结合能力，
导致膜的脆化
或
性能下降
。因此，对于NC膜而言，避免使用甲醇浸泡是更为合适的选择。
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