HPLC谱图异常问题、原因及解决方案

医药大世界 · 公众号 · 药品 · 2017-08-29 17:43

正文

液相色谱系统的许多问题都可以在谱图上反映出来。其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决；而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键所在。

A.峰拖尾

原因	解决办法
1. 筛板阻塞；	1 ． a. 反冲色谱柱； b. 更换进口筛板； c. 更换色谱柱；
2. 色谱柱塌陷；	2. 填充色谱柱；
3. 干扰峰；	3. a. 使用更长的色谱柱； b. 改变流动相或更换色谱柱；
4. 流动相 pH 选择错误；	4. 调整 pH 值，对于碱性化合物，低 pH 值更有利于得到对称峰；
5. 样品与填料表面的溶化点发生反应；	5.a. 加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂。 b. 更改色谱柱。

B.峰前延

C.峰分叉

原因	解决办法
1. 保护柱或分析柱污染；	1. 取下保护柱再进行分析；如果必要更换保护柱；如果分析柱阻塞，拆下来清洗；如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施；如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。
2. 样品溶剂不溶于流动相；	2. 改变样品溶剂；如果可能采取流动相作为样品溶剂；

D.峰变形

原因	解决办法
1. 样品过载；	1. 减少样品载量；

E．早出的峰变形

原因

解决办法

1. 样品溶剂选择不恰当；

1. a. 减少进样体积；

b. 运用低极性样品溶剂；

F．早出的峰拖尾程度大于晚出的峰

原因

解决办法

1 ．柱外效应；

1. a. 调整系统连接（使用更短、内径更小的管路）；

b. 使用小体积的流通池；

G．K’增加时，脱尾更严重

原因	解决办法
1 . 二级保留效应，反相模式；	1 . a . 加入三乙胺（或碱性样品）； b . 加入乙酸（或酸性样品）； c . 加入盐或缓冲剂（或离子化样品）； d . 更换一支柱子；
2 . 二级保留效应，正相模式；	2 . a . 加入三乙胺（或碱性样品）； b . 加入乙酸（或酸性样品）； c . 加入水（或多官能团化合物）； d . 试用另一种方法；
3 . 二级保留效应，离子对；	3 . 加入三乙胺（或碱性样品）；

H．酸性或碱性化合物的峰拖尾

原因

解决办法

1 . 缓冲不合适；

a . 使用浓度 50 ～ 100mM 的缓冲液；

b . 使用 P ka 等于流动相 p H 值的缓冲液；

I．额外的峰

原因	解决办法
1 . 样品中有其他组份；	1 . 正常；
2. 前一次进样的洗脱峰；	2 . a . 增加运行时间或梯度斜率； b . 提高流速；
3 . 空位或鬼峰；	3 . a . 检查流动相是否纯净； b . 使用流动相作为样品溶剂； c . 减少进样体积；

J.保留时间波动

K.保留时间不断变化

L.基线漂移

原因	解决办法
1 . 柱温波动；（即使很小的温度变化都会引起基线波动；通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器；）	1 . 控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器；
2 . 流动相不均匀；（流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移）	2 . 使用 HPLC 级的溶剂，高纯度的盐和添加剂；流动相在使用前进行脱气，使用中使用氦气；
3 . 流通池被污染或有气体；	3 . 用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池；如有需要，可以用 1N 的硝酸。（不要用盐酸）
4 .