T细胞受体(TCR)/CDR3复合物结合肽-MHC复合物，提供T细胞活化的第一信号；通过“共刺激”受体，如T细胞上的CD28结合靶细胞上的CD28配体（CD80/CD86），提供第二信号，两种信号的协同作用下，T细胞得到充分活化。
T细胞活化/免疫突触形成的信号1和信号2（文献3）
基于CD3的T细胞双特异性抗体（TCB）替代传统第一信号，通过双特异性抗体的TSA抗体臂结合肿瘤，通过另一臂CD3抗体与T细胞相连，经典的T细胞双抗（TCB）TSAXCD3在癌症患者中表现出了良好的抗肿瘤疗效，但它们的活性仍可进一步优化。
TSAXCD28双抗增强TSAXCD3双抗活性
再生元(Regeneron Pharmaceuticals)构建TSAXCD28双特异性抗体，来模拟激活T细胞的第二信号，在基因人源化小鼠模型或非人灵长类动物中，单独使用时表现出有限的活性和没有明显毒性。然而，当与TSAXCD3双特异性抗体联合使用时，可以显著增强T细胞与其靶细胞之间的突触形成，增强T细胞的激活，显著提高TSAXCD3双特异性的抗肿瘤活性（如下图）。
体外实验促进T细胞增殖
Jurkat T细胞（效应细胞）和HER293（共表达两种肿瘤特异性抗原PSMA和CD20，作为靶细胞）共孵育。加入CD20XCD3+PSMAXCD28 双特异性抗体Combo，可以显著促进Jurkat T细胞增殖（和单纯加CD20XCD3抗体相比），且呈剂量依赖的关系。但是不存在CD20XCD3的条件下，单纯PSMAXCD28并不促进Jurkat T增殖。
TSAXCD28双抗增强TSAXCD3双抗的肿瘤细胞杀伤活性
在PSMA阳性的前列腺癌细胞系（C4-2）和MUC16+的卵巢癌细胞系（PEO-1），加入效应细胞（人分离的PBMCs），TSAXCD28/MUC16XCD 3+TSAXCD3 Combo组显示出强的肿瘤杀伤活性，效应分子（IFN-γ等）表达升高。如果是non targetXCD3+PSMAXCD28/MUC16XCD28，则基本无肿瘤杀伤活性。显示TSAXCD28单独存在时，并无促进T细胞肿瘤杀伤活性的能力。
异基因小鼠卵巢癌模型
MUC16XCD3+MUC16XCD28Combo组，显示出强的抗肿瘤活性。
人源化小鼠模型
在人源化同种基因小鼠卵巢癌模型和前列腺癌模型，Combo组同样显示出强的抗肿瘤活性。IFN-γ，IL-2等效应分子表达量升高。
小结
经典T细胞的活化，需要TCR/CD3+MHC-肽（第一信号）和CD28-CD80/CD86(第二信号)两条信号的激活。基于CD3的双特异性抗体，约占据了全球双抗研发的半壁江山，虽然在临床上取得了很大的进展，但是因为其只是提供了T细胞活化的第一信号通路，并不能完全发挥T细胞的活性。再生元开发了TSAXCD28双抗和TSAXCD3双抗组成Combo，显示能增强T细胞活性，并具有更强的肿瘤杀伤活性。而且TSAXCD28单独存在的条件下并无活性，因而一定程度预示在临床上其免疫相关副作用也会比较低，是一个有前途的组合疗法。
不过，再生元不断搞Combo，这临床使用成本是否有点高? 降低了可及性。
主要参考文献
J. B. Huppa, M. M. Davis,T-cell-antigen recognition and the immunological synapse. Nat. Rev. Immunol. 3,973–983 (2003).
J. H. Esensten, Y. A. Helou, G.Chopra, A. Weiss, J. A. Bluestone, CD28 costimulation: From mechanism totherapy. Immunity 44, 973–988 (2016).
Dimitris Skokos et al，A class of costimulatory CD28-bispecific antibodies that enhance theantitumor activity of CD3-bispecific antibodies，SciTransl Med . 2020 Jan 8;12(525):eaaw7888. （注：文中图片源于本篇文献）
