A与B经典机制通路，你也可以这样写

作者：亢小玉

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今天给大家分享的是一款经典机制通路： 在一定环境下，A通过某种方式（Methods）调节B。

对该类文章的分析的套路小编通过海量的阅读做出了以下几个部分的总结：

（1）A在该环境下的表达水平；

（2）B在该环境下的表达水平；

（3）在该环境下所谓某种方式（Methods）是如何表现的；

（4）A与B之间通过（3）发生了怎样的化学反应（信号通路）及进一步验证A与B的关系。

为此我今天给大家分享的文章题目为： MeCP2 Regulates PTCH1 Expression Through DNA Methylation in Rheumatoid Arthritis 。（回复 170619 可下载，一月有效）

环境”为：RA模型（AA Rat’s Synoioal Tissues and FLSs）

“A”为：MeCP2

“B”为：PTCH1

Methods为DNA methylation（从题目中还不知是A的甲基化，还是B的甲基化）。

由以上套路，我们来进行对应分析：

风湿性关节炎(RA)是一种自身免疫性炎症性疾病，其中发病机制还不清楚。许多研究证实了纤维囊状的滑膜细胞 (FLSs)在风湿性关节炎发病机制中起到关键作用，其参与软骨损伤和增生滑膜，并促进炎性细胞因子的释放。本文作者就构建了RA模型（包括AA Rat’s Synoioal Tissues 和FLSs），进行A与B的机制探索。

（1）MeCP2在RA模型中的表达水平增高，采用IHC、WB及IF技术验证。

免疫组化结果显示在滑膜样组织中模型鼠的MeCP2的表达水平较对照组高；蛋白水平显示MeCP2的表达水平与对照组相比显著增高；免疫荧光表明在FLS细胞中MeCP2的表达水平较对照组高。

（2）PTCH1在RA模型中的表达水平下降，采用IHC、WB及IF技术验证。

免疫组化结果显示在滑膜样组织中模型鼠的PTCH1的表达水平较对照组低；蛋白水平显示PTCH1的表达水平与对照组相比显著下降；免疫荧光表明在FLS细胞中PTCH1的表达水平较对照组低。

（3）DNA甲基化导致了PTCH1表达水平的下降。

首先，作者采用5-Azadc治疗AA，降低了MeCP2的表达，5-Azadc是甲基化的特殊抑制剂。WB显示用5-Azadc阻断甲基化后，PTCH1表达水平上升。

其次，从DNA序列进一步研究，PTCH1的基因结构，丰富的GC Point，所以构成一个大的CpG岛。CpG岛的甲基化致使PTCH1的基因表达水平下降。

最后，作者发现了伴随着PTCH1的表达水平下降的信号通路。当PTCH1表达下降时，Glil和Shh的蛋白水平是升高的；当用5-Azadc处理AA rat后，发现Glil和Shh的蛋白水平是下降的；同时细胞因子也发生变化，IL-6和TNF-α的表达水平也下降。

以上这些信息表明5-Azadc是通过抑制Hh信号路径来抑制PTCH1的DNA甲基化。同时，也可说明PTCH1的DNA甲基化是通过Hh信号通路实现的。

（4）验证MeCP2与PTCH1在类风湿性关节炎中的关系。

作者构造了MeCP2-SiRNA干扰MeCP2的质粒，并转染纤维样滑膜细胞（FLS）。

导致了：

PTCH1表达水平的升高

Shh和Glil的表达水平下降 ，表明（3）中Hh的信号通路被抑制；