三级淋巴结构中的B细胞如何增强抗肿瘤免疫？

今天我们为大家介绍一篇发表在《Gastroenterology》上的最新研究论文，题目是《Tertiary Lymphoid Structure-Associated B Cells Enhance CXCL13+CD103+CD8+ Tissue-Resident Memory T-Cell Response to Programmed Cell Death Protein 1 Blockade in Cancer Immunotherapy》。这项研究由南京医科大学的Yun Chen教授团队完成。

研究背景与目的

尽管在许多实体恶性肿瘤中，三级淋巴结构（TLS）的存在与对免疫疗法的积极响应相关，但TLS如何增强抗肿瘤免疫的机制尚不清楚。本研究旨在探讨TLS内B细胞与组织驻留记忆T细胞（Trm）之间的相互作用机制，并解析了其在免疫治疗中的作用。

研究结果

1. TLS和CXCL13+CD103+CD8+ Trm细胞的存在有助于提高对抗PD-1疗法的响应：

• 在胃癌患者的肿瘤组织中，TLS和CXCL13+CD103+CD8+ Trm细胞的存在与抗PD-1疗法的良好响应相关。

• 激活的B细胞通过淋巴毒素-α/肿瘤坏死因子受体2（TNFR2）轴增强CD103+CD8+ Trm细胞的CXCL13和颗粒酶B分泌。

• B细胞通过TNFR2轴促进CD103+CD8+ Trm细胞的糖酵解，机制靶向雷帕霉素信号通路在此过程中发挥关键作用。

• CXCL13+CD103+CD8+ Trm细胞在TLS中的存在有助于通过TNFR2依赖的机制增强对免疫检查点抑制剂的响应

研究的关键技术和方法

体外组织培养实验：从胃癌患者获取肿瘤组织，将组织切割成约750 μm的碎片，在含10%的胎牛血清的RPMI 1640培养基中添进行体外培养，并加入自体人血清、IL2、转铁蛋白-胰岛素-硒混合物等，培养8小时后加入抗PD-1抗体进行进一步培养。

体外CD103+CD8+组织驻留记忆T细胞培养系统：这个系统用于分析CD103+CD8+ Trm细胞在B细胞作用下的功能变化，特别是研究糖酵解和信号通路对这些细胞功能的影响，具体操作如下：

• T细胞的纯化和培养：

• 抗CD3/CD28磁珠包板，再含有、转化生长因子-β（TGF-β; 1 ng/mL）、白细胞介素2（IL2; 100 IU/mL）、L-谷氨酰胺（5 mmol/L）、HEPES（5 mmol/L）、非必需氨基酸（5 mmol/L）的RPMI 1640培养基中培养纯化的总T细胞7至9天：

• Trm细胞的预处理：

• 分选后的CD103+CD8+ Trm细胞进行预处理，使用以下物质：TNFR2中和抗体（10 μg/mL）、2-脱氧-D-葡萄糖（2-DG; 5 mmol/L）、雷帕霉素（20 nmol/L）

• Trm细胞的进一步培养：

• 将预处理后的CD103+CD8+ Trm细胞转移至含有CD3-交联抗体和IL2（100 IU/mL）的RPMI 1640培养基中，在此条件下培养3天。

• B细胞的激活：

• 将CD19+ B细胞用以下物质刺激18小时：

• 抗IgM抗体（5 μg/mL）

• 脂多糖（LPS; 5 μg/mL）

• CpG-DNA寡脱氧核苷酸（CpG; 2.5 μg/mL）

• 刺激后，洗涤B细胞并与CD103+CD8+ Trm细胞共同培养。

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