手把手教学｜扫描电子显微镜之植物组织的叔丁醇干燥法

文章类型：实验方案

阅读时长：5 分钟

1 背景介绍

什么是干燥？

干燥是指去除植物组织中的水分并且保存植物组织的正常形态不受损伤，如皱缩、破损、变形等的过程。

为什么要干燥？

1、植物组织含水量较大，若直接放入扫描电镜真空仓中观察，其形态会因真空而形变塌陷；

2、植物组织中的水分会污染扫描电镜的物镜、灯丝等元件；

3、水分的存在会影响扫描电镜的成像效果，降低分辨率；

4、水分的存在会造成离子溅射过程中的放电现象，从而干扰镀膜及组织形态的干燥。

利用扫描电子显微镜观测植物组织表面形貌时，需要先对植物组织进行干燥处理，去除其内部水分。常用的干燥方法有 自然干燥法、烘箱干燥法、乙醇干燥法、叔丁醇干燥法和临界点干燥法 。

其中对于大多数组织而言，叔丁醇干燥法和临界点干燥法在保存组织形态的真实完整性方面较其他方法存在明显优势。

但因临界点干燥法需要特殊的临界点干燥仪才能进行，而叔丁醇干燥法只需要真空泵即可完成干燥，操作简便快捷，适用于常规实验操作。接下来，介绍 叔丁醇干燥法的实验原理、实验步骤和注意事项。

2 实验原理

叔丁醇，化学式C4H10O，无色油状液体，凝固点23.5℃，低真空环境下即可升华，用叔丁醇作为介质干燥植物组织，可以避免气液界面对样品的损伤，从而保存组织的生活状态。

3 实验步骤

1、根据实验目的选取特定部位的植物组织于装有3%戊二醛固定液的离心管中固定24h，组织大小为3mm ³ ；

2、使用0.1mol PBS（pH7.4）的缓冲液清洗组织3次，每次10min，洗去多余的戊二醛固定液；

3、梯度叔丁醇脱水，其中30%、50%、70%、90%叔丁醇各脱水一次，每次15min；100%叔丁醇脱水三次，每次15min；

4、吸弃离心管中的叔丁醇，再重新加入少量的叔丁醇（没过组织即可），放入4℃冰箱中30min至叔丁醇凝固成固体。

5、取出离心管放入真空干燥皿中，打开真空泵抽真空至0.08MPa以上，2h左右叔丁醇即可升华完毕，留下干燥的组织。

6、取出组织，粘在粘有导电胶的样品台上，放入离子溅射仪中镀膜后即可放入扫描电子显微镜中进行观察。

4 注意事项

1、植物组织取材之前，若表面杂质较多，需用去离子水或者缓冲液轻柔的清洗组织表面；

2、组织块的大小要控制在3mm ³ 左右，如果无法减小组织块的体积，脱水时间要根据组织大小有所增加；

3、更换梯度叔丁醇时，尽可能的吸弃离心管中的叔丁醇，但要保证组织不暴露在空气中；

4、纯叔丁醇脱水要彻底，水分的存在使叔丁醇在4℃条件下无法凝固。

5 往期专题

实验老司机公众号共发布超过1300篇实验知识文章，以下是我们按照实验应用归类整理的部分专题汇总链接：