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技术干货|免疫沉淀(IP)成功指南免费下载

BioArt  · 公众号  · 生物  · 2025-03-20 00:02

正文

免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)是一种免疫检测技术,它利用抗原与抗体之间的特异性反应,从不均一的细胞或组织提取物中富集特定蛋白质。在免疫沉淀过程中,特异性识别目的蛋白(抗原)的抗体被用来捕获这种蛋白质,目的蛋白被捕获后,通过添加如 Protein A 或 G 微珠等亲和层析介质来沉淀抗原-抗体复合物,然后通过洗涤以去除未结合的物质,获得富集后的蛋白。最后,可以使用 Western Blotting(WB)、质谱分析等方法来鉴定和分析所获得的目标蛋白质。


免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation, Co-IP)则通过富集天然状态下的蛋白质复合物来研究蛋白质-蛋白质相互作用。一种蛋白质(称为“诱饵”)是免疫沉淀的目标,复合物中的另一种蛋白质(称为“猎物”)被用于下游分析。免疫共沉淀实验是在非变性条件下进行的,以保持蛋白质复合物的完整性。

免疫(共)沉淀实验常用于研究蛋白质-蛋白质相互作用、蛋白质翻译后修饰以及蛋白质复合体组成等,是生物化学和分子生物学研究中的重要工具。

本手册将着重介绍免疫沉淀搭配下游 WB 检测的实验流程中的关键步骤,我们还将讨论在免疫沉淀实验中选择经过充分验证的抗体的重要性。最后,我们会提供 CST 科学家们使用的且与 CST 抗体搭配使用表现最佳的常用辅助试剂清单。



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