2017
年12月22-24日 周五-周日21日报到
(
理论与实验相结合)
参会学员免费获得一份
CRISPR/Cas9
三合一对照质粒
授课讲师寄语：
CRISPR/Cas9
基因靶向修饰技术学习班在国内已经连续主办了十六期
，
由于课程是本人自主设计和编排，信息量大、专业性强、操作性强，深受广大学员好评，当然深受欢迎的同时也吸引了其他同行的模仿和抄袭，这也是对我本人的一种肯定和鼓舞，激励着我去不断调整和优化课程内容。我们每期授课的内容都在不断的更新，以传授CRISPR/Cas9基因靶向修饰最新技术。本班的特点是每位学员必须动手实验操作，空洞的理论效果很差。过去的学习班为了让每位学员都能动手实验操作，不得不控制人数。
经讨论决定2017年12月底继续举办第十七期CRISPR/Cas9基因靶向修饰技术学习班，欢迎新老学员前来参加，我们共同探讨，共同学习。
南京大学模式动物研究所教授：
赵庆顺
本期课程安排
第一天
上午9:00-12:00
第一讲、基因组靶向修饰技术简介
1
、基因组靶向修饰技术发展简史
2
、基因组编辑技术的工作原理
3
、第一代基因组编辑技术
ZFN 4
、第二代基因组编辑技术
TALEN 5
、第三代基因组编辑技术
CRISPR/Cas9
第二讲、CRISPR
的设计
1
、
CRISPR
设计的依据及原则
2
、常用
CRISPR
设计软件简介
3
、
CRISPR
的在线设计演练
4
、靶向编辑基因的基因型确认（目标基因扩增引物设计策略）及
CRISPR
的再设计
第一天
下午13:00-17:00
第三讲、CRISPR/Cas9基因组编辑工具的制备及向细胞内的递送策略
1、
DNA
形式的基因组编辑工具的制备与递送
2
、
RNA
形式的基因组编辑工具制备及递送
3
、
RNP
形式的基因编辑工具的制备与递送
实验一： CRISPR/Cas9 基因组编辑工具All-in-One表达质粒的构建（1）
CRISPR
模板的制备
第四讲、sgRNA活性验证
1、
体外法
2
、体内法
2.1
插入缺失（
Indel
）突变检测的基本策略
2.2
基于胚胎反应器的活性验证方法
2.3
基于细胞系的活性验证方法
实验二： CRISPR/Cas9 基因组编辑工具All-in-One表达质粒的构建（2）
CRISPR
模板与线性化
All-in-One
载体的重组、
转化、
携带基因组编辑工具的转化子的培养
实验三：sgRNA活性体外验证（1）
酶切反应的建立
第二天
上午9:00-12:00
第五讲、利用CRISPR技术创建基因组编辑细胞系
1、
基因敲入（如点突变和报告基因等）的供体设计原则及实例分析
2
、基因组编辑工具导入细胞系的方法（转染与转导）
3
、基因组编辑细胞系的筛选及基因型的快速确认
4
、敲入和
/
或敲除基因的功能确认策略
实验四：CRISPR/Cas9 基因组编辑工具All-in-One表达质粒的构建（3）
阳性转化子的快速验证法（
PCR
法）
实验五：基因组编辑突变体子的基因型鉴定（1）
基因组
DNA
模板的快速制备、目标基因组
DNA
片段的
PCR
扩增
第二天
下午13:00-17:00
第六讲、利用CRISPR技术创建基因敲除或敲入动物突变体
1
、
RNA
或
RNP
基因组编辑工具（和供体）递送至受精卵
2
、初建者（
F0
）体细胞携带靶向突变等位基因的确认
3
、基因组编辑突变体（
F1
）的筛选
4
、建系（
F2
）
5
、基因敲除
/
敲入的功能确认策略
第七讲、利用CRISPR技术创建基因敲除或敲入植物、真菌 和 细菌突变体
1
、基因组编辑工具的制作 2、基因组编辑工具的递送 3
、基因组编辑突变体
（F1）的
的筛选
4
、建系（
F2
）
5
、基因敲除
/
敲入的功能确认
实验六：CRISPR/Cas9 基因组编辑工具All-in-One表达质粒的构建（3）
电泳确认
实验七：sgRNA活性体外验证（2）
电泳观测sgRNA活性实验结果
实验八：基因组编辑子等位基因的基因型鉴定（2）
电泳识别基因组编辑突变体
第三天
上午9:00-12:00（12:00以后课程结束）
第八讲、基因组编辑技术的脱靶问题
1、
脱靶的产生原因
2
、脱靶检测
3
、解决脱靶问题的方法
4
、脱靶问题对不同领域研究者的意义
第九讲、利用CRISPRi或CRISPRa技术调控基因在细胞中的表达
1
、
dCas9
的特征简介
2
、运用
CRISPR
技术调控基因在细胞中表达的基本实验过程
