C18的用法大全

• 大极性样品难保留时，可选用亲水C18，并用纯水相洗脱，以延长驻留时间，甚至可以双柱串联。

• 小极性样品难洗脱时，用乙腈搭配乙醇洗脱，或乙腈搭配二氯甲烷等洗 脱。

• 可用来富集或浓缩样品：对于水比例较高的稀溶液，可以将目标物富集吸附到C18上，然后再用高比例的有机相洗脱，达到浓缩的目的。

C18使用注意事项

• 常规C18的使用，不能用纯水相洗脱，流动相中至少含有3%有机相，否则会发生C18键合相疏水塌陷，造成色谱柱没有保留能力。疏水塌陷后可用有机相再将疏水C18链展开。下面（a）图显示长链是舒展开的；（b）图显示为长链疏水塌陷。

图片参考文献【1】

• 在pH限定范围内使用，常规C18的pH耐受2-6，特殊键合的C18（杂化修饰）可耐受pH1-12，但还是不建议长时间保存在极端pH环境中。
  

• 柱温一般不超过50℃，最高不超过60℃。

• 水相使用超纯水或蒸馏水，有机相试剂使用色谱纯以上级别。

• 缓冲盐流动相需过0.45 µm 滤膜后使用。

• 用缓冲盐，有机相比例不能超过75%(具体看盐浓度和盐的溶解性)，完成实验后用高比例水相置换掉缓冲盐，再换高比例有机相冲洗色谱柱。

• 为了延长C18柱的寿命，最好专柱专用，尤其是酸碱性条件不能频繁切换。

• 方法开发 时，尽量使 用新色谱柱。

参考文献：[1] Przybyciel, M. & Majors, Ronald. (2002). Phase Collapse in Reversed-Phase LC. LC-GC Eur. 15. 15. 1-5.