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为什么是AUC值而不是GSEA来挑选转录因子呢

生信菜鸟团  · 公众号  · 生物  · 2020-11-24 19:36

正文

前面我们通过RcisTarget包的 cisTarget() 函数,一句代码就完成了我们的hypoxiaGeneSet.txt文本文件的171个基因的转录因子注释。见: 基因集的转录因子富集分析

通过学习,我们知道这个RcisTarget包内置的motifAnnotations_hgnc是16万行,可以看到每个基因有多个motif。而且下载好的 hg19-tss-centered-10kb-7species.mc9nr.feather 文件,也是 24453个motifs的基因排序信息。但是我们留下来了一个悬念,如何从几万个注释结果里面挑选到最后100个富集成功的motif呢?

首先批量计算AUC值

如果是单细胞转录组数据里面,每个单细胞都是有一个geneLists,那么就是成千上万个这样的calcAUC分析,非常耗费计算资源和时间,就需要考虑并行处理,我们这里暂时不需要,所以直接 nCores=1 即可。

其中geneLists和motifRankings来自于前面的教程,见: 基因集的转录因子富集分析

motifs_AUC <- calcAUC(geneLists, motifRankings, nCores=1)
motifs_AUC

可以看到是 24453个motifs的AUC值都被计算了:

> motifs_AUC
AUC for 1 gene-sets and 24453 motifs.

AUC matrix preview:
             jaspar__MA1023.1
geneListName       0.03819963
             taipale_cyt_meth__IRX3_NACGYRNNNNNNYGCGTN_eDBD_meth
geneListName        0.05625049
             taipale__DBP_DBD_NRTTACGTAAYN
geneListName     0.0640565
             cisbp__M4240
geneListName   0.02816458
             scertf__macisaac.ACE2
geneListName       0.03124153

挑选统计学显著的motif

auc <- getAUC(motifs_AUC)[1,]
hist(auc, main="hypoxia", xlab="AUC histogram",
     breaks=100, col="#ff000050", border="darkred")
nes3 <- (3*sd(auc)) + mean(auc)
abline(v=nes3, col="red")

可以看到 24453个motifs的AUC值看起来满足正态分布,一般来说,对正态分布,我们会挑选 mean+2sd范围外的认为是统计学显著,但是作者卡的比较严格,是 mean+3sd ,示意图如下:


看看Area Under the Curve (AUC)如何计算

这个时候就需要一个取舍了,我们是否需要知道每个细节,比如GSEA分析,我也多次讲解:

但实际上,绝大部分读者并没有去细看这个统计学原理,也不需要知道gsea分析的nes值如何计算,或者说这个Area Under the Curve (AUC)如何计算。

我这里也不想耗费时间去深究,去讲解了。不理解原理并不影响大家使用,知道这个概念, 知道如何根据AUC值去判断结果就好 。其实这个包的核心在于motifRankings变量,数据库文件来自于前面的教程,见: 基因集的转录因子富集分析 ,也是很容易制作的,选取人类的不到2000个TF的全部chip-seq数据的peaks文件的bed,把人类的2万个基因的启动子区域的该TF的信号强度排序即可。

然后看看motif的详情

这个RcisTarget包内置的motifAnnotations_hgnc是16万行,可以看到每个基因有多个motif,我们挑选出来了105个moif,去这个表格里面筛选一下,就只剩下82个了。

data(motifAnnotations_hgnc)
motifAnnotations_hgnc
cg=auc[auc>nes3]
names(cg)
cgmotif=motifAnnotations_hgnc[match(names(cg),motifAnnotations_hgnc$motif),]
cgmotif=na.omit(cgmotif)

高级分析之可视化motif

前面的教程,一句代码就完成了motif的富集 ,见: 基因集的转录因子富集分析

这个时候,我们可以根据 addLogo 函数,对我们富集好的转录因子的motif加上一些 可视化图表 ,代码如下:

motifEnrichmentTable_wGenes
motifEnrichmentTable_wGenes_wLogo <- addLogo(motifEnrichmentTable_wGenes)
library(DT)
datatable(motifEnrichmentTable_wGenes_wLogo[,-c("enrichedGenes""TF_lowConf"), with=FALSE], 
          escape = FALSE# To show the logo
          filter="top", options=list(pageLength=5))

这些motif都是数据库已知的,其可视化如下:


高级分析之网络图

这里面的 R代码技巧 还是蛮值得细细品读的:







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