表皮生长因子受体（EGFR）是非小细胞肺癌（NSCLC）常见的驱动基因。尽管以EGFR突变为代表的驱动基因阳性NSCLC既往一直被认为是免疫治疗的“禁区”，但近年来的研究显示，部分EGFR突变NSCLC患者也能从免疫检查点抑制剂中获益。因此有必要对EGFR突变NSCLC患者进一步细分，并探索其肿瘤免疫微环境（TIME） 特征，旨在为EGFR突变NSCLC患者开辟新的免疫路径。既往研究表明，基因共突变不仅影响细胞内的内在癌症特征，而且会重塑NSCLC患者的TIME。近日，沈阳药科大学王立辉教授团队在Cancer Research杂志发表了一项研究，探讨了EGFR突变肺癌模型中常见的EGFR共突变对免疫治疗疗效的影响，以及这些共突变如何影响TIME，以期识别新的免疫生物标志物。
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EGFR共突变基因谱分析：通过cBioPortal数据库分析，研究者确定了7个频率较高的EGFR共突变基因，包括TP53、CDKN2A和RB1等。基于这些结果，构建了7种EGFR共突变细胞模型，并在体外实验中发现EGFR/TP53和EGFR/CDKN2A共突变细胞模型对EGFR-TKI和PD-1抑制剂联合治疗最为敏感。
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体内模型的治疗反应：在小鼠异位肺癌模型中，EGFR突变和EGFR/MDM2共突变模型对EGFR-TKI单药治疗和EGFR-TKI和PD-1抑制剂联合治疗的敏感性无显著差异；EGFR/TP53共突变体模型对单药治疗无明显反应，对联合治疗更敏感；而EGFR/CDKN2A共突变模型不仅对EGFR-TKI单药治疗反应良好，且与PD-1单抗联合治疗时肿瘤抑制率可达到75.1%，这表明不同的EGFR共突变类型对EGFR-TKI联合ICIs具有不同的敏感性，提示共突变可能会改变肿瘤的生物学特性，影响对ICIs的敏感性。
EGFR/CDKN2A共突变NSCLC激活更强免疫应答
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临床证据支持：通过cBioPortal数据库分析发现，与EGFR CDKN2A野生型患者相比，EGFR伴CDKN2A突变的NSCLC患者在接受免疫治疗后生存期更长。
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小鼠模型验证：在人PBMCs移植小鼠模型中，与单一EGFR突变肿瘤相比，EGFR/CDKN2A共突变肿瘤对EGFR-TKI单药治疗呈现耐药性，但对EGFR-TKI联合PD-1抑制剂治疗极为敏感，肿瘤体积显著缩小甚至消失。
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免疫微环境的变化：与单一EGFR突变肿瘤相比，联合治疗显著促进了EGFR/CDKN2A共突变肿瘤中IFN-γ和TNF-α的分泌，增加了CD8+ T细胞和NK细胞的浸润，并抑制了M2型巨噬细胞和MDSCs的浸润。
CDKN2A缺失通过调节c-Myc促进PD-L2表达
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PD-L2表达与CDKN2A突变的相关性：临床数据库分析显示，CDKN2A突变的癌症中PD-L2表达显著上调，尤其是在肺腺癌中。此外，LUAD蛋白质组学数据进一步显示CDKN2A编码蛋白的表达与PD-L2蛋白的表达呈显著的负相关。LLC-Em细胞模型进一步揭示，敲除CDKN2A导致PD-L2表达上调。
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分子机制探究：c-Myc是PD-L2的转录因子，c-Myc可以直接与CDKN2A编码的蛋白p14ARF相互作用，而不能与p16INK4a相互作用。研究发现CDKN2A缺失导致c-Myc表达增加，进而通过减少c-Myc的泛素化降解来上调PD-L2的表达。
PD-L2阻断通过免疫调节抑制EGFR/CDKN2A共突变肺癌
PD-L2阻断增强EGFR/CDKN2A共突变肺癌对免疫疗法的敏感性
体外实验表明，与单一EGFR突变细胞相比，EGFR/CDKN2A共突变肺癌细胞对PD-L2阻断抗体治疗更为敏感。为了进一步探究PD-L2在EGFR/CDKN2A共突变肺癌中的作用，研究者构建了PD-L2基因敲除的EGFR/CDKN2A共突变细胞模型。结果显示，PD-L2的缺失使得这些细胞对PD-L2阻断抗体不敏感，表明PD-L2是介导EGFR/CDKN2A共突变肺癌对免疫治疗敏感性的关键因素。
在C57BL/6同种异体小鼠模型中，研究者通过稳定敲除PD-L2的方式，进一步验证了PD-L2阻断在体内对EGFR/CDKN2A共突变肺癌的抑制效果。结果显示，PD-L2的缺失显著增强了肿瘤对EGFR-TKI的敏感性，并促进了激活的淋巴细胞浸润，特别是CD8+ T细胞的比例和IFN-γ的表达。
PD-L2阻断与EGFR-TKI联合治疗的协同效应
在体外实验中，研究者发现PD-L2阻断抗体与EGFR-TKI联合使用时，能够显著抑制EGFR/CDKN2A共突变肺癌细胞的生长，并促进CD8+ T细胞分泌IFN-γ。在小鼠模型中，与单一治疗相比，PD-L2阻断与EGFR-TKI的联合治疗显示出更强的抗肿瘤效果，肿瘤生长受到显著抑制，肿瘤抑制率达到了较高水平。
研究发现，免疫治疗的疗效与NSCLC中EGFR共突变的类型相关。在EGFR/CDKN2A共突变肺癌细胞中，PD-L2的高表达介导了TIME的重塑，增加了对免疫治疗的敏感性。PD-L2的阻断可以激活EGFR/CDKN2A共突变肺癌中CD8+ T细胞介导的抗肿瘤免疫反应。此外，研究还提出，随着对先天免疫和TIME认识的加深，小分子免疫抑制剂的作用逐渐被重视。靶向PD-L2的小分子免疫抑制剂可以改善EGFR/CDKN2A共突变肿瘤的TIME，并增强EGFR-TKI治疗效果，为EGFR/CDKN2A突变的NSCLC患者的治疗开辟了新路径。
