CRISPR/Cas9基因靶向修饰技术学习班通知

第十一期CRISPR/Cas9基因靶向修饰技术学习班

玮瑜主办  江苏.南京
2017年5月12-14日 周五-周日 

 (理论与实验相结合，请认准 南京大学模式动物研究所赵庆顺教授主讲)

会议大楼

培训现场

实验现场

学员反馈

“CRISPR/Cas9系统是一种新兴的基因定点编辑技术，越来越被研究者所关注。在赵庆顺教授理论结合实际、幽默接地气的授课方式下，为期两天半的培训轻松且充实，让我从对 CRISPR/Cas9技术的毫无所知，到对该技术原理及应用有了的全面认识；同时，结合开展的实验环节，掌握了 CRISPR 序列的设计，基因组编辑工具的制备及向细胞内递送的方法；熟悉了利用 CRISPR 技术在动植物中敲入和敲除的过程；了解了 CRISPR/Cas9脱靶问题解决方案。通过本次学习，受益匪浅！”

——学员留言

本期还是赵庆顺老师全程主讲，聘请专业技术人员指导完成基因组编辑基础实验。学员除在全面了解基因组编辑理论知识之外，均可在专业人员指导下，独立完成以 CRISPR/Cas9技术进行基因组编辑研究的系列实验；参会人员更可提前准备好自己科研中遇到的问题，通过三天现场的 “讲座 + 实验 + 答疑”的学习和交流，有机会全面掌握 CRISPR/Cas9技术应用的方法及技巧；同时免费获得一份 CRISPR/Cas9三合一对照质粒（含 CMV 启动子驱动的人源化 Cas9表达构件、爪蛙 Ef1a启动子驱动的绿色荧光蛋白筛选标记表达构件、以及人 U6启动子驱动的靶向识别人 P53基因的 sgRNA 表达构件---含可用于制备 sgRNA 体外转录模板的 sgRNA 骨架模板）。

主讲老师简介

赵庆顺，1987年本科毕业于南京大学，获学士学位；1990年硕士研究生毕业于南京大学，获硕士学位； 2001年博士研究生毕业于普渡大学获博士学位。2001-2003年在杜克大学医学中心 Elwood Linney 教授指导下进行博士后训练。1990-1996，先后任南京大学助教和讲师；2003加入南京大学模式动物研究，任副教授，2006年晋升为教授，2007年聘为博导。

赵庆顺等教授在2016年9月15日的 Genome Biology 上发表了关于新 DNA 编辑工具——SGN 的文章。该工具与 CRISPR、TALEN、NgAgo 等工具相比，最大的特点就是不受靶序列的限制。文章指出，SGN 能特异性识别和捕获目标，来准确切割任何 DNA 序列。

日程安排

第一天上午9:00-12:00

第一讲、基因组靶向修饰技术简介

1、基因功能研究的分子遗传学技术简介

2、基于 NHEJ 修复的基因敲除和基于HR修复的基因敲入  

3、ZFN 和 TALEN 技术

4、CRISPR/Cas9技术     

第二讲、CRISPR 的设计

1、目标基因结构及功能的生物信息学分析

2、CRISPR 的设计原则

3、CRISPR 的在线设计（可自带可无线上网之笔记本电脑或手机）

4、靶向编辑基因的基因型确认及 CRISPR 的再设计

第一天下午13:00-17:00

第三讲、基因组编辑工具的制备及向细胞内的递送策略

1、基因组编辑工具之 DNA 表达元件的制备与递送策略

2、基因组编辑工具转录产物制备及递送策略

3、基因编辑工具RNP的制备与递送策略

实验（或技术细节答疑）一： CRISPR/Cas9 基因组编辑工具All-in-One表达质粒的构建（1）

1、CRISPR模板引物的准备

2、CRISPR模板的制备

3、退火CRISPR模板与线性化CRISPR/Cas9 All-in-One载体的重组

4、大肠杆菌的转化

5、携带基因组编辑工具的转化子的涂板培养

第二天上午9:00-12:00

第四讲、sgRNA活性验证

1、体外法

2、体内法

2.1 插入缺失（Indel）突变检测的基本策略

2.2 基于胚胎反应器的活性验证方法

2.3 基于细胞系的活性验证方法

实验（或技术细节答疑）二：CRISPR/Cas9 基因组编辑工具 All-in-One 表达质粒的构建（2）

基因组编辑工具之 CRISPR/Cas9 All-in-One重组子的快速验证法（PCR 法）  

实验（或技术细节答疑）三：基因组编辑子等位基因的基因型鉴定

1、基因组DNA模板制备

2、目标基因的基因组DNA片段的PCR扩增

第二天下午13:00-17:00

第五讲、利用 CRISPR 技术创建基因组编辑人及动物细胞系

1、创建基因组编辑细胞系的基本过程

2、基因敲入的供体 DNA 的设计原则及基因敲入供体设计实例

3、表达 CRISPR 的All-in-One表达质粒（和供体）导入细胞系的方法

4、阳性细胞克隆筛选

5、靶向突变的基因型鉴定及基因组编辑细胞系的建立

6、敲入基因和敲除基因（无效等位基因）的确认

7、建立基因组编辑细胞系的优选策略

第六讲、利用 CRISPR 技术创建基因敲除或敲入动物

1、创建基因组编辑动物突变体的基本过程

2、sgRNA/Cas9 mRNA（和供体）共显微注射入受精卵中建立初建者

3、初建者体细胞携带靶向突变等位基因的确认

4、基因敲除/敲入动物（F1）的鉴定

5、基因敲除/敲入动物品系（F2）的建立

6、敲除/敲入基因的确认

7、建立基因敲除或敲入突变体动物的优选策略

第七讲、利用 CRISPR 技术创建基因敲除或敲入植物

1、创建基因组编辑植物突变体的基本过程

2、双元载体的转染

3、基因敲除/敲入植物（F1）鉴定

实验（或技术细节答疑）四：实验结果的点评与讨论

1、CRISPR/Cas9 All-in-One 重组子的 PCR 产物电泳检测结果点评

2、基因组编辑等位基因的基因型鉴定电泳检测结果的点评

3、测序是验证基因组编辑结果的金标准  

第三天上午9:00-12:00（12:00以后课程结束）

第八讲、基因组编辑技术的脱靶问题

1、脱靶的产生原因

2、脱靶检测

3、解决脱靶问题的方法

4、脱靶问题对不同领域研究者的意义

第九讲、利用 CRISPRi 或 CRISPRa 技术调控基因在细胞中的表达

1、dCas9的特征简介

2、运用 CRISPR 技术调控基因在细胞中表达的基本实验过程

3、CRISPR 技术的转录抑制

4、CRISPR 技术的转录活化

第十讲、CRISPR技术的伦理学问题

1、 新型基因组编辑技术的发展（碱基编辑）

2、基因组编辑技术的应用

3、基因组编辑技术对未来社会的革命性的影响

4、基因组编辑技术的伦理学问题

【主办单位】

上海玮瑜生物科技有限公司

【时间地点】

2017年5月12-14日   南京市 江北新区 浦口经济开发区低碳谷

【住  宿】

为了便于接送、统一指定南京龙华大酒店，住宿自理

标准间（含早）280元/人  合住140元/人 南京浦口区江浦街道龙华路2号近南京工业大学浦口校区

【收费标准】

 3300元/人 (不含住宿费)  授课期间发放纸质邀请函（盖章） 按交费先后顺序确定名额及座位，注册费包含教材、午餐等费用。 

【付款方式】

1，转账或支付宝：

A：银行转账

账户名称：上海服淡信息科技有限公司     账 户 号：31578103002581719

开 户 行：上海银行桃浦支行

B：支付宝转账

收款人：[email protected]     支付宝户名:上海玮瑜生物科技有限公司

2，现场刷卡或现金（支持刷公务卡）

联系人：谢老师  13611825136   指定报名邮箱：[email protected]

参会报名方法

报名方法一：邮件报名 

复制下面的回执表并请将此表填写完整后发送到E-mail:[email protected]并发送手机短信“姓名”到 13611825136。

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报名方法二：在线填写报名表单，按下图操作