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国自然
作者：荷叶
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程序性细胞死亡蛋白1（PD-1）是免疫检查点，在激活的T细胞中表达上升，能够诱导免疫耐受。在肿瘤细胞表面常高表达其配体PD-L1，通过与PD-1结合使肿瘤细胞逃脱机体的免疫杀伤。
在肿瘤微环境中，PD-1不仅能抑制T细胞的免疫功能，还能抑制B细胞、NK细胞和DC细胞的功能。近年研究发现，巨噬细胞在病原刺激下也有PD-1的表达，并且与巨噬细胞极化相关，但在肿瘤相关巨噬细胞TAM中有无PD-1的表达呢？其PD-1在肿瘤中又发挥怎样的作用呢？
Gordon等对此展开研究，取得了重要进展，结果发表于《Nature》。荷叶在此与大家分享该文章。
第一步：
建立CT
26结肠癌小鼠皮下荷瘤模型，FACS和免疫荧光染色的方法分析了TAM上PD-1的表达，发现50％以上的TAM表达PD-1，并且随着荷瘤时间的延长，PD-1＋TAM的比例逐渐增高。
第二步：
通过骨髓移植实验分析PD-1＋TAM的来源。具体为：RFP＋小鼠骨髓移植给射线照射的GFP＋小鼠，在该嵌合体小鼠上建立MC38结肠癌皮下荷瘤模型。结果发现，与肿瘤浸润的淋巴细胞（TIL）一样，PD-1＋TAM主要来源于RFP＋骨髓细胞。
第三步：
PD-1＋TAM的表型特征分析。具体为：通过FACS的方法分选肿瘤中PD-1＋TAM，Giemsa染色见其胞体大，透射电镜显示胞浆中含较多吞噬的物质和溶酶体（提示吞噬消化能力下降）。
分析了PD-1＋TAM的M1/2极化状态，结果显示，PD-1＋TAM主要呈“促肿瘤”的M2极化状态。
第四步：
体外、体内实验检测PD-1＋TAM的吞噬能力。分选的肿瘤中PD-1ˉ和PD-1＋TAM，体外比较其吞噬GFP金葡菌的能力，可见PD-1＋TAM吞噬细菌的能力下降。
进一步在CT26/YFP＋荷瘤小鼠上研究体内吞噬实验，发现PD-1＋TAM吞噬YFP＋肿瘤的能力明显降低。当敲除肿瘤细胞的PD-L1后PD-1＋TAM吞噬能力明显增强。
第五步：
抗TAM的PD-1/PD-L1对结肠肿瘤的影响。为了排除其他免疫细胞的影响，选择T，B，NK细胞发育或功能缺陷的NSG小鼠接种肿瘤；为了排除肿瘤细胞自身表达的PD-1对抗PD-1抗体治疗起反应，选择不表达PD-1的人结肠癌DLD细胞，且DLD细胞过表达PD-L1（以便激活TAM上的受体PD-1）。
