夏老师在PubMed上冲浪的时候，找到了这么一篇有意思的文章，这篇文章是上海同济大学肺科医院发表在10.7分的Redox Biol上的。他们把肺移植巨噬细胞与中性粒细胞之间的Crosstalk做得明明白白的，还形成了一个正反馈通路，这篇文章里推进和假设迭代的过程还真是有点意思：
首先在LTx（肺移植）后，浸润的中性粒细胞产生NETosis，导致I/R（缺血再灌注）损伤。那么期间的机制到底是什么呢？首先，他们分析了LTx后中性粒细胞产生NETosis的现象之间是否有关联性，他们使用了几个NETosis的靶标进行了相应的验证。（这里还是插一句，之前NETosis还是给大家介绍过的哈，是一种中性粒细胞特殊的死法，会释放DNA和一些蛋白形成网状结构）：
他们在建立了LTx和非损伤后，引发中性粒细胞NETosis的关联性后，提出了一个假设，假设AM（肺泡巨噬细胞）也参与了损伤后中性粒细胞的NETosis。于是他们进行了进一步的实验，就是通过抑制剂耗尽AM，然后在验证肺部损伤后的中性粒细胞的NETosis是否会产生影响（这里其实就是柯霍氏法则的验证，通过移除肺巨噬细胞这一关键关键因素，验证其对于NETosis的具体功能，不清楚柯霍氏法则的话，可以去看看《轻松的文献导读》和《列文虎克读文献》）。结果发现AM的确参与了I/R后的中性粒细胞NETosis。而在NETosis的过程中，中性粒细胞会释放组蛋白，组蛋白也能引发巨噬细胞的极化反应，于是他们迭代了假设，假设中性粒细胞NETosis产生的组蛋白也能反馈影响AM的极化。结果显示组蛋白的确能激活AM的M1极化：
那么这个组蛋白在这里是否会扮演一个正反馈中的关键角色呢？于是他们又进一步迭代了假设，假设这个组蛋白激活的巨噬细胞，是诱导中性粒细胞NETosis产生的关键。通过组蛋白诱导后的AM与中性粒细胞共培养发现，的确组蛋白是激活AM诱导NETosis的关键因素。而用肝素抑制中和组蛋白后，可以阻遏AM对中性粒细胞NETosis的激活。那么问题来了，AM是通过什么来激活中性粒细胞的NETosis的呢？他们通过数据的挖掘分析，发现巨噬细胞中CTSC的表达量会明显增强（下面这种热图和主成因PCA分析其实之前给大家讲过的，不清楚这些图要怎么看的话，可以回去翻翻《夏老师带你读文献》复习下）。那么CTSC既然是AM中高表达的，也必须通过旁分泌才能释放到细胞外，诱导中性粒细胞产生NETosis。而CTSC是位于溶酶体中的，释放出CTSC就需要通过LMP（溶酶体膜通透性）增强。他们发现组蛋白能促进AM的溶酶体产生LMP现象，从而释放CTSC：
CTSC是AM中高表达的蛋白，同时可以被组蛋白激活释放，那么假设就又迭代成了：CTSC是否能激活中性粒细胞的NETosis？他们在这里再一次使用了柯霍氏法则的验证，在敲减了CTSC的AM中，使用组蛋白进行刺激，然后通过共培养分析中性粒细胞的NETosis（这里主要是为了 验证CTSC的关键作用，又要排除组蛋白对AM的其他机制的诱导，所以采用了这种策略，不清楚柯霍氏法则的话，可以回去看看《轻松的文献导读》和《列文虎克读文献》）：
结果证明了CTSC的确是AM激活中性粒细胞NETosis的关键，那么既然CTSC能激活NETosis，而NETosis的激活途径其实还是有很多的。那CTSC具体激活的是什么途径呢？于是他们对不同的激活NETosis的途径，使用了抑制剂，比如mitoROS（线粒体ROS）、NOX（NADPH氧化酶），结果抑制mitoROS并么有对CTSC诱导的NETosis造成影响，而抑制NOX则能缓解CTSC诱导的NETosis。也就是说CTSC通过触发NOX诱导的ROS，导致了中性粒细胞的NETosis：
那么CTSC是如何激活NOX的呢？假设就需要继续迭代了，由于CTSC直接可以作用于p38，于是他们假设可能CTSC会通过p38影响下游的NOX活化（p38大家应该熟悉了，这个是在MAPK信号通路上的p38/MAPK这个分支上的，在MAPK信号通路的研究中，算是比较常见的了，不熟悉的话，可以去看看《信号通路是什么鬼？》系列复习下）。通过使用抑制剂验证发现，的确p38/MAPK是CTSC诱导NOX活化以及NETosis的关键。那么具体NOX是如何被激活的呢？由于NOX的激活是需要通过残基上几个位点的磷酸化，于是他们假设又迭代成了NOX的磷酸化是受到了p38/MAPK调控的。还是通过抑制剂的验证发现，p38/MAPK的确能调控NOX的p47phox和p67phox的磷酸化，但其中p47phox的磷酸化是关键因素：
那么CTSC作为半胱氨酸外肽酶，可以激活NSP（中性粒细胞丝氨酸蛋白酶），而mPR3是一个NSP。于是他们又进一步假设，CTSC可以激活mPR3，来影响中性粒细胞的NETosis相关的炎症反应。结果显示，CTSC的确能通过上调和激活mPR3，参与并促进NETosis相关炎症反应：
最后是一个小鼠中的体内实验，既然CTSC对于中性粒细胞的NETosis以及炎症反应这么重要，那么抑制CTSC应该可以缓解相关的症状。于是他们对I/R模型小鼠中的CTSC进行了抑制，结果发现CTSC的抑制，可以减轻小鼠的NETosis和肺I/R损伤：
这篇文章最后形成了这样的示意图。这整个过程，其实就是一个正反馈的通路（不清楚正反馈的话，可以回去看看《信号通路是什么鬼？》系列，在讲PI3K-AKT信号通路、mTOR信号通路和NFκB信号通路之间交互的时候，提到过正反馈和负反馈的通路过程），这个通路是AM巨噬细胞受到了组蛋白的激活，产生了M1极化，导致了AM的溶酶体产生了LMP，提高了CTSC的分泌。分泌的CTSC通过激活中性粒细胞中的p38/MAPK信号通路激活了NOX，产生大量ROS导致了中性粒细胞的NETosis，同时CTSC通过激活mPR3，促进了NETosis过程中的炎症反应。NETosis产生了的组蛋白，又回头激活了AM的M1极化及CTSC分泌，如此循环往复，产生了正反馈通路：
总的来说，这篇文章的推理过程是很有意思的，一步步反推把整个通路顺藤摸瓜地找出来。而正反馈通路其实算是整个过程中的一个亮点，通过对于NETosis产生组蛋白的这样一个假设，把整个正反馈通路给联系了起来。证据链上也都做得相对比较严谨，算是一篇不错的文章了。好了，今天就先策到这里吧，有兴趣的话可以看看原文，祝你们心明眼亮。
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