在液相色谱分析中，反相色谱的应用占据80%以上，反相色谱的填料类型也是非常多的。
反相色谱的填料种类包括：C18，C12，C8，苯己基，醚联苯基，五氟苯基，C5，C4；还有对键合相做不同修饰的、特殊处理的，比如亲水的、耐受宽pH的；还有基球粒径不同的、孔径差异的、比表面积或碳含量多少的等等。
我们了解到这么多种类的反相填料，具体到实际应用中，该如何去选择呢？
1.分析物的极性
我们首先识别分析物的极性大小，比如极性特别大，常规C18保留不住，我们可以尝试高碳含量或高比表面积的C18，且柱长更长的，甚至可以两支色谱柱串联使用，并降低流速，以增加分析物在色谱柱内的分离时间；还可以选择亲水C18，用纯水相去洗脱来增强保留。
如果分析物极性特别小，比如油脂类、或疏水性大分子（空间位阻的影响），我们可以选择C8或者C4。
2.分析物结构上的特殊基团
若分析物结构上有多个苯环，尤其了解到
分析物各组分结构上有π-
π相互作用差异的，可以选择苯己基、醚联苯基或五氟苯基等。下面这个例子就是分析物为苯环上的位置异构。
如果我们已知样品酸碱性，或者尝试分析发现峰型难看的，一般会将流动相调为低pH或高pH来优化峰型，这时就要选择有机杂化的填料，可耐受pH范围更宽。
普通的硅胶基质键合填料长时间处于低pH下，键合相会水解；
长时间处于高pH下，硅胶会溶解，色谱柱前端填料会塌陷，柱压会升高。下面的例子就是碱性样品在碱性条件下，普通C18和有机杂化C18的区别。
3.分析物的分子量
我们确定待分析物质的分子量大小，或者大分子的分子直径。分子量大于5000的，我们要选择填料孔径大于150Å，分子量大于10000的选择300
Å以上的孔径填料。
4.样品组分的分离难度
如果样品中组分复杂，很难分离，可以选择小粒径填料，来提高分辨率。
综上所述，选择反相色谱柱时，需要综合考虑化合物的极性、结构、化合物官能团、
溶解性
、
流动相pH值、
柱子的pH值使用范围和填料的端基封尾等因素。通过仔细评估这些因素，可以确保选择的色谱柱能够满足特定分析需求，提供最佳的分离效果和使用体验。
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