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作者：小杜
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话说要是十年前，你研究miRNA，那可是热的不能再热的领域了，然而今天我依然在研究miRNA，有人就开始怼我了：还在研究miRNA呢，你做一大堆工作还不是只能发一两分，有意思吗？
之前我确实也有过这样的担忧，研究miRNA还有意思吗？正如之前做的在体外构建一个肺癌缺氧的模型，然后用芯片筛查miRNA差异表达，通过miRNA表达谱，得到实验组与正常组miRNAs的高表达和低表达，然后进行验证。这样的文章确实分数不高，但是也不能说研究miRNA就不能发高分文章了吧，来看看这篇，六分也是妥妥的。
MiR-127 and miR-376a act as tumor suppressors by in vivo targeting of COA1and PDIA6 in giant cell tumor of bone（回复170912可下载，一周有效）
发表在Cancer Lett上，首先简要地背景介绍：骨巨细胞瘤（GCTB）是原发性骨肿瘤的一种，虽然大体上属于良性肿瘤，但是由于一般与膨胀性溶骨性缺损相关，其具有高复发率和潜在的恶性转化。组织学上，骨巨细胞瘤包括各种多核巨细胞、组织细胞和成纤维细胞样基质细胞（gctsc）。
而gctsc应该能够代表骨巨细胞瘤群，因为它们不仅具有无限增殖的能力，而且有能在小鼠或受精鸡蛋的绒毛尿囊膜上的成瘤性。gctscs驱动肿瘤是由单核细胞的聚集和RANKL（受体激活NF-κBκ配体）介导的破骨细胞的形成。然而，促进肿瘤发展的分子机制还未知。
方法首先从组织样本中分离出主要的gctsc，进行传代培养。然后进行原代细胞系转染，提取细胞的总RNA进行逆转录和实时荧光定量PCR，然后进行鸡胚异种移植的体内实验，原位杂交，最后得出数据分析。
首先是候选miRNA和靶基因的鉴定，实验组GCT（巨瘤细胞）和对照组MSC（间充质干细胞）有差异表达的miRNAs,通过进一步控制条件和文献查阅已经报道的相关基因，锁定在miR 127-3p, miR-376a-3p和相关的靶基因COA1（细胞色素C氧化酶组装因子1）和PDIA6（蛋白质二硫键异构酶家族成员6）。
在对候选miRNA和靶基因表达的调控验证过程中，利用野生型WT和阴性对照NC来进行实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹，得到的结果是正如预期的那样，用miRNA模拟转染导致mir-127-3p和mir-376a-3p表达水平明显高于野生型和阴性对照细胞，因此，PDIA6和CoAl的表达通过miRNA表达的恢复和转染靶基因特异性siRNA而显著下降。
为了探讨候选miRNAs的恢复是否可能影响肿瘤细胞植入和生长的作用，将gctsc转染细胞株移植到鸡胚CAM。针对mir-127-3p和mir-376a-3p恢复是否抑制肿瘤体内植入和生长。
从图中也可以明显看出，在用gctsc细胞瞬时转染miRNA模拟物和移植后，根据测定每个异种移植的大小、体积等，发现肿瘤的发生率相当高，对mir-127-3p和mir-376a-3p恢复后肿瘤发生率减少到17%和47%。
同样，siRNA介导的miR-127和miR-376a沉默也在体内表现出抑制肿瘤的生长。
最后，文章总结出几点全文最重要的观点：
miR-127和miR-376a在体内作为肿瘤抑制剂；
恢复miR-127和miR-376a的表达能够降低肿瘤的生长；
沉默靶基因PDIA6和CoAl可以减缓肿瘤的生长。
统观全文，就是这三点翻过来翻过去地论证，值得一提的是文章中的异种移植的模型是通过gctsc转染细胞株移植到鸡胚CAM，有一定的创新性。看完文章，是不是觉得这六分的也不是太难，毕竟除了文章中作者用到的原位杂交和实时荧光定量PCR，我们还可以用芯片来筛查验证啊，而且还是可以一次性筛查四种RNA的哟，你懂得！
