主要观点总结
文章描述了一种在实验室工作中的经历，其中涉及到了PCR实验数据的分析以及一场关于荧光定量PCR技术的线上直播课程的信息。课程中将介绍PCR原理、数据计算方法和影响结果准确性的因素等内容。
关键观点总结
关键观点1: 实验室经历与PCR数据分析
作者描述了他在实验室进行PCR实验的经历，分析结果时导师路过并发表了一些相关的评论。同时，师兄弟对实验结果的不同解读引发了一些讨论。
关键观点2: 直播课程介绍
天根生化将开展线上专题直播课程，内容涵盖荧光定量PCR技术与MIQE金标准，从原理到数据分析，无论初学者还是经验丰富的实验者都能从中受益。此外，参与直播还有机会获得精美好礼。
关键观点3: 直播课程重点内容
直播课程将重点介绍荧光定量PCR的原理，包括常见标记方法、扩增曲线和熔解曲线的概念，以及qPCR数据计算方法举例和实例分析。同时，还会探讨影响结果准确性的因素。
正文
谁懂啊，好不容易加班加点把 qPCR 跑完，分析数据时导师路过了，他一句话没说，转头竟在大群里发消息说不要在工位上做一些与实验无关的事，例如看股票。师兄师姐闻讯赶来，看着我的结果图哈哈大笑。
你的熔解曲线出现双峰，这一般是引物非特异扩增导致的。
正好过两天有个 qPCR 课程，从原理到数据解析都会讲到，咱们可以一起学一学！
天根生化将于 9 月 12 日 15:00 开展线上专题直播课程「荧光定量 PCR 技术与 MIQE 金标准」，从原理、实验流程到 qPCR 数据分析及结果准确性因素剖析，手把手教学 qPCR 实验技巧，无论你是基础小白还是经验丰富的老手，此次课程都会让你有所收获，让你的 qPCR 技能更上一层楼。此外，参与直播还有机会赢取计时器、保温杯等精美好礼！
1）荧光定量 PCR 常见标记方法：SYBR Green I 染料标记、TaqMan Probe 标记
扩增曲线：qPCR 过程中，以循环数为横坐标，以荧光强度为纵坐标，以反应过程中实时荧光信号所做的曲线。
▲ 应为平滑的 S 型扩增曲线，阳性结果（科研）理想的 CT 值范围：15 35；技术重复之间的 CT 差异 < 0.5。
熔解曲线：指随温度升高 DNA 的双螺旋结构解链程度的曲线。分析该曲线可以用来确定不同的反应产物，包括非特异性产物。
▲ 熔解曲线应有单一锐利的峰，mRNA：Tm 值在 80～90 ℃；miRNA : Tm 值在 70～80 ℃。
Ct 值：PCR 扩增过程中，扩增产物的荧光信号达到设定的阈值时所经过的扩增循环次数。
1）绝对定量解析方法
Log（起始浓度）与循环数（CT 值）呈线性关系，通过已知起始拷贝数的标准品，可作出标准曲线，即得到该扩增反应存在的线性关系。
根据待测样品 Ct 值，就可以计算出样品中所含的模板量。
2）相对定量解析方法
1. 目的基因 Ct 值的归一化：
ΔCt（实验组）= Ct（实验组的目的基因）- Ct（实验组的管家基因）
ΔCt（对照组）= Ct（对照组的目的基因）- Ct（对照组的管家基因）
2. 实验组 ΔCt 的归一化：
ΔΔCt = 各样本的 ΔCt - 对照组的 ΔCt
3. 表达水平的差异倍数：2–ΔΔCt
影响 qPCR 结果准确性的因素：RNA、反转录、数据分析等。
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内容策划：沈佳钰
内容审核：钟可可
题图来源：自己做的
