专题汇总｜蛋白相互作用分析

实验老司机 · 公众号 · · 2025-02-01 07:00

正文

蛋白质相互作用分析实验是研究生物体内蛋白质之间相互作用的重要手段，通过这些实验可以揭示蛋白质复合体的组成及其在生物学过程中的功能角色。

一些常用的蛋白质相互作用分析实验方法包括：

免疫共沉淀 (Co-IP): 基于抗体对特定抗原的特异性识别，从复杂的细胞或组织提取物中富集目标蛋白及其结合伙伴，再借助蛋白质A或G磁珠将这些复合物沉淀下来，通过SDS-PAGE和Western Blotting等技术对共沉淀的蛋白质进行鉴定;
GST-pull down: 一种体外检测蛋白互作的方法，通过将目标蛋白与谷胱甘肽亲和树脂结合，再与待检测的蛋白混合，如果两者之间有相互作用，目标蛋白就会与待检测蛋白结合并被吸附在树脂上，最后通过Western blot等技术检测到结合的蛋白;
酵母双杂交 (Y2H): 在酵母细胞中检测蛋白互作的方法，通过将两个蛋白的基因分别与报告基因的转录激活域融合，在两个蛋白相互作用时，报告基因就会被激活，从而得到蛋白互作的结果;
生物膜干涉 (BLI): 一种无标记光学生物传感技术，用于实时监测分析生物分子相互作用，并对其结合强度和动力学进行量化分析;
双分子荧光互补 (BiFC): 用于判断目的蛋白在活体细胞中的定位和是否发生相互作用，通过将两个蛋白分别与荧光蛋白的N端和C端融合，如果两个蛋白相互作用，荧光蛋白会重新形成完整的荧光蛋白，从而发出荧光;
邻近蛋白标记 (BioID): 通过将生物素连接酶(BirA)与诱饵蛋白融合表达，加入适量生物素，融合蛋白的相互作用/附近环境中的蛋白质会被生物素化，之后通过链霉亲和素或Strep-Tactin磁珠进行富集和鉴定。