摘要：
巨噬细胞是黑素瘤生长和存活的关键参与者。一般来说，巨噬细胞可分为M1或M2激活表型。 越来越多的证据表明，黑素瘤外泌体也促进了肿瘤的存活和转移。然而，黑素瘤外泌体在直接影响巨噬细胞功能方面的作用知之甚少。在本研究中，使用建立的黑素瘤外泌体来源（B16-F10）进行体外ELISA，RT-qPCR和巨噬细胞功能研究。相关结果显示黑素瘤外泌体可以诱导混合的M1和M2促肿瘤巨噬细胞活化表型。
引言：
外泌体是细胞衍生的细胞外纳米囊泡，直径大约100nm，取决于它们的起源细胞。与可溶性介质类似，肿瘤外泌体可以促进肿瘤支持过程。例如，黑素瘤来源的外泌体可以介导免疫抑制。它们可以直接相互作用并抑制自然杀伤细胞和细胞毒性CD8 +淋巴细胞或诱导骨髓衍生抑制细胞（MDSC）。 MDSC可以增强抗肿瘤CD8 +淋巴细胞的活性，促进M2巨噬细胞（Mφ）极化并募集促肿瘤调节性T细胞。黑素瘤外泌体通过促血管生成功能进一步支持黑素瘤生长。它们以体外剂量依赖性方式直接诱导内皮细胞增殖，内皮球体生长和内皮球体萌芽。黑素瘤外泌体中发现的一些促血管生成和免疫调节因子包括白细胞介素6（IL-6），血管内皮生长因子A（VEGF-A）和基质金属蛋白酶2（MMP2）。据报道，黑素瘤外泌体将骨髓祖细胞重新编程为促血管表型。
巨噬细胞是肿瘤发病机制的关键参与者。 它们可以根据功能分为两大类（M1和M2）。M1极化Mφ，具有抗肿瘤功能，而M2肿瘤相关MTS（TAM），促进肿瘤生长。
巨噬细胞是黑素瘤生长和存活的关键参与者。越来越多的证据表明，黑素瘤外泌体也促进了肿瘤的存活和转移。然而，黑素瘤外泌体在直接影响巨噬细胞功能方面的作用知之甚少。在本研究中，使用建立的黑素瘤外泌体来源（B16-F10）进行体外ELISA，RT-qPCR和巨噬细胞功能研究。相关结果显示黑素瘤外泌体可以诱导混合的M1和M2促肿瘤巨噬细胞活化表型。
结果：
图
1
：在
RAW264.7
细胞中，通过
ELISA
检测黑色素外泌体诱导
M1
和
M2
巨噬细胞因子。选择
LPS
和
IL-4
作为阳性对照。图
1a
：用
LPS
或黑素瘤外泌体刺激后，
Mφs
显着增加了
M1
细胞因子
TNF-α
的产生。然而，使用
LPS +
外泌体的组合治疗与仅用
LPS
处理的细胞类似。图
1b
：用
LPS
刺激，
Mφs
显着增加
M1
细胞因子
IL-1β
的产量。
单独外泌体刺激后对
IL-1β
产生没有显着影响。然而，
LPS +
外泌体组合与单独使用
LPS
相比，
Mφs
产生了更多的
IL-1β
。图
1c
：用
IL-4
或黑素瘤外泌体刺激
Mφs
导致
M2
细胞因子
TGF-β
产生没有显着增加。用
IL-4 +
外泌体刺激反而导致
TGF-β
减少。图
1d
：用
IL-4
刺激
Mφs
导致
M2
细胞因子
IL-10
无显着增加。
然而，用黑色素瘤外泌体显着增加了
IL-10
的产生。
IL-4 +
外泌体的组合刺激较单独
IL-4
刺激，也明显增加了
IL-10
产生。
图
2
：
在
RT-qPCR
阵列上鉴定的标记黑素瘤外泌体上调
M1
和
M2
巨噬细胞极化。
图
2a
：在用
LPS
处理后的
RAW264.7
Mφs
，在
mRNA
水平上
M1
产生
IL-1β
和
TNF-α
的细胞因子的上调结果与
ELISA
结果是一致的。图
2b
：在
IL-4
处理后，
mRNA
水平的
M2
细胞因子
IL-10
的产量显着增加，比
ELISA
结果更显着。与使用
ELISA
观察到的细微降低相比，在用
IL-4
刺激后的
mRNA
水平观察到
TGF-β
表达中适度但不显着的增加。
图
3
：用
RT-qPCR
方法在
RAW 264.7
巨噬细胞中由黑素瘤外泌体诱导的
M1
和
M2
细胞因子基因表达调节。图
3a
：黑色素外泌体诱导
M1
标记物。
图
3b
：
黑色素外泌体诱导混合
M1
/
M2
的标记物。
图
3c
：
黑素瘤外泌体诱导M2
的
标记物
。
图
4
：用
RT-qPCR
方法
在原代巨噬细胞中由黑素瘤外泌体诱导的
M1
和
M2
细胞因子基因表达调节。图
4a
：黑素瘤外泌体诱导
M1
标记物。
图
