来源 | NIRO（ID：NIRO-keyanmiao）
编辑 | 澹泊研究僧
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这期就从这话题
“平板培养时为何需要倒置呢？”
开始吧！
在此之前，我们先了解这些基本技巧。
1. 怎么确定固体培养基倾注的温度在45-50℃呢？
首先，先用手轻抚一下瓶身，感觉瓶身比较温，换手背感受后发现比较烫，有种
“哎呦，烫烫烫”的感觉，那这温度估计就差不多是50℃
(口诀: 手心不烫手背烫)
。
因为如果温度过高，培养基凝固时间会变长，这会导致在培养皿上出现大量凝水，从而对后续实验造成影响。特别是在平皿中，冷凝水会影响菌层分布，进而影响抑菌圈的准确性。另外，如果需要添加不耐热抗生素等试剂到培养基中，温度过高会导致这些试剂失效。
由于琼脂粉的凝固温度大约在40℃左右，因此固体培养基在40℃左右开始凝固结块。如果在这个温度下倒出培养基，平板会出现凹凸不平的情况，既影响美观性也影响使用效果。
平板凹凸不平确实也可以用，但是这会很糟心。所以对那些凹凸有致的实验平板，我们还是敬而远之吧。
当我们发现培养基开始凝固时，千万不要倒平板！不要倒平板！不要倒平板！重要的事情说三遍。如果发现培养基开始凝固后，我们先将锥形瓶封口后，用微波炉或电磁炉等加热工具重新加热，溶解后重新冷却至45-50℃倒平板。
这种情况后，灭菌完成后，琼脂粉分布不均，需要摇匀。第一种情况，温度较高时，要摇匀，产生气泡无需担心，当温度升高后气泡就会自动消失，但太烫，就比较危险；第二种情况，待温度下降至50-60℃，轻轻沿壁摇匀，让培养基整体沿着同一方向摇起来，直到摇匀为止。
温度降至45-50℃，在加入抗生素等试剂，轻轻沿壁摇匀，让培养基整体沿着同一方向摇起来，直到摇匀之后。
用微波炉等加热设备重新加热一下，温度高后气泡也就从培养基中跑出来。
以75mm培养皿为例，其直径75mm、内高度约17mm，可以盛放约76mL水(实际测量值可能略有不同)。对于固体培养基，通常倒平板时大概使用20~25mL。
其中，20mL对应的高度约为3mm，25mL对应的高度约为4mm。根据经验而言，75mm的培养皿，直径为75mm，内高大约为17mm，能装下75mL水；
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因此，
倒平板时，20mL的水量，大约高3mm；35mL的水量，大约高4mm。所以，可以根据这个高度来估摸培养基的厚度。或者就是倒的时候，先铺满培养皿，再多倒一点，就刚刚好20mL，再多到一点就25mL，这就根据手感来确定了。
1. 避免培养基与培养皿脱离
在培养实验中，经过制备好的平板需要进行培养时要倒置的主要原因之一是为了避免培养基与培养皿脱离。当我们刚刚完成平板的倒置并盖上培养皿盖后，培养基尚未完全凝固，因此还存在余温和较高的湿度，导致皿盖上会有一些水珠凝结。
如果平板保持正放状态，这些水滴可能会流入培养基内，并有可能导致污染发生。此外，水分过多的培养基可能会使菌种在接种时四处流动，导致菌膜长成时不均匀，并给后续的计数工作带来困难。倒置平板将有助于避免这些问题的发生，保持培养基与培养皿的稳定连接。
2. 平板倒置拿取方便
在整个培养过程中，我们可能需要多次打开培养箱取放平板。如果平板处于正放状态，存在风险将皿盖不慎掀开，增加实验中污染的可能性。相比之下，倒置的平板在拿取时能够保持结构完整，不易出现皿底和皿盖分离的情况，从而降低环境中杂菌污染的风险。因此，为了确保实验的准确性和成功性，倒置平板在培养过程中起着重要作用。
3. 利于菌种生长和繁殖
首先，倒置培养有利于菌种的生长和繁殖。在需要通风的培养条件下，倒置的平板可以减少培养基表面的空气流动，从而减缓培养基中水分的蒸发速度。这有助于保持琼脂等固体培养基中的水分含量，保持其弹性，延长培养基出现干裂的时间。因此，倒置培养有利于促进菌种的生长和繁殖。
4. 防止培养过程中杂菌污染
倒置培养可以防止培养过程中的杂菌污染。通过减少平板内的空气流动，外来的杂菌侵染可能被最大限度地减少。这对于保持培养环境的纯净度至关重要，避免了杂菌对培养基和培养物的污染。
5. 有利于营养物质富集和观察计数
倒置培养也有利于营养物质在培养基中的富集，并便于观察和计数微生物。受到重力的影响，培养基中的营养物质会富集在培养基表面及表面以下的次层。这种富集有助于微生物的生长和繁殖。同时，由于菌落不会太快地扩散，观察时更容易辨认菌落的特征，方便进行后续的计数和分析工作。
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平板涂布是一个常见的操作步骤。在进行这个过程时，许多人可能会遇到接种量过多的情况，为了避免细菌过度生长，通常会选择将涂布后的平板置于超净台上晾一段时间，然后再放入培养箱进行培养。
这里给大家分享一个小技巧: 在进行平板培养之前，将平板放入培养箱中正面朝上静置1-3分钟，然后再倒置进行培养。这个过程可以有效地帮助均匀分布细菌，并且有助于避免细菌聚集在平板的某一侧。
