Hepatology | 更敏感、更特异的抽血查肝癌新方法——甲基化DNA

高危人群进行肝癌筛查有助于早期发现肝癌、增加根治性治疗的可能并改善总生存。美国肝病研究学会建议使用超声联合或不联合甲胎蛋白（AFP）每半年一次进行筛查。但这个策略存在诸多局限，需要可行性更好、更廉价、更准确的生物标志物。针对非蛋白质类生物标志物的肝癌“液体活检”指向循环肿瘤细胞、循环DNA或外泌体产物，其中，肝脏或肝癌来源的甲基化DNA能可靠地区分HCC患者和健康人群。在 Hepatology 杂志上在线发表的一篇文章中，来自美国梅奥医学中心等机构的研究人员初步展示了通过血浆甲基化DNA检测来发现HCC的应用前景。

研究者首先对18份HCC组织和35份对照组织分别提取DNA，进行简化代表性亚硫酸氢盐测序（Reduced representation bisulfite sequencing，RRBS），随后在提取自另外一批样本（74例HCC，29例对照）的DNA中通过定量甲基化特异性PCR确认候选甲基化DNA标志物（methylated DNA markers，MDMs）。

接下来，研究者开展了I期前导性研究，从另外21例HCC患者和30例肝硬化患者（作为对照）的血浆中提取DNA，进行等位基因特异性实时定量PCR靶向和信号扩增实验。之后又开展II期研究，使用目标富集长探针定量扩增信号测定法（target enrichment long-probe quantitative amplified signal，TELQAS）对95例HCC患者、51例肝硬化对照和98名健康对照者进行研究。最后，利用分类决策树来确定最佳的MDM组合，并在训练集和验证集中进行交叉验证。

最终的结果显示，在使用B3GALT6的水平标化后，包括6种MDM的组合（HOXA1，EMX1，AK055957，ECE1，PFKP，CLEC11A）得到的拟合AUC最高，达0.96（95%CI：0.93-0.99），诊断HCC的灵敏度为95%，特异性为92%。

对于不同分期的HCC，这个组合的检出率分别为：0期75%（3/4）、A期93%（39/42）、B期93%（13/14）、C期100%（28/28）。与AFP相比，这个交叉验证过的MDM组合的AUC显著更高（0.94 vs. 0.80）， P ＜0.0001。

总结研究发现，研究者认为这个MDM组合对于检测包括早期病灶在内的HCC有很高的准确性，优于AFP，并且在无HCC的肝硬化人群和无已知肝病的健康对照人群中都有很高的特异性。有了这样的组合，可以通过血浆即可准确发现HCC。研究者建议对其开展进一步的优化并进行临床验证。

原文链接：Kisiel JB, Dukek BA, Kanipakam RVSR, et al. Hepatocellular Carcinoma Detection by Plasma Methylated DNA: Discovery, Phase I Pilot, and Phase II Clinical Validation. Hepatology. 2018 Aug 31. doi: 10.1002/hep.30244.