梯度建立公式

色谱 · 公众号 · · 2024-08-29 20:09

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优化梯度条件的目的是优化目标组分的分离，使得目标峰之间，或者目标峰与干扰峰的分离度加大。优化梯度的方式，一个是降低强洗脱溶剂的比例，延长目标组分的出峰时间，二是放缓梯度，即减缓强洗脱溶剂的比例的变化速率。

对于一个未知样品，或没有液相分析的数据，我们一般先走一个大梯度，比如反相，流动相乙腈和水，大梯度可以设置成乙腈比例5-95%，梯度时间10min。然后根据结果再进行梯度优化。

前后多个峰都需要分离

如果大梯度条件的结果，从头到尾都有峰需要分离，那么要增加分离度的话，需要在原有大梯度的基础上，拉长梯度时间。

下面这个例子，大梯度的结果是，出峰时间分别在2.9min、6.2min，以及7min附近有多个峰没有分开。我们直接将梯度时间拉大到40min，梯度的变化速率放缓，各组分的出峰时间依次延后，使各组分的分离度变大。

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