淫羊藿
Epimedii Folium
为小檗科植物淫羊藿
Epimedium
b
revicornu
Maxim.
、箭叶淫羊藿
Epimedium
sagittatum
(Sieb. et Zucc.) Maxim.
、柔毛淫羊藿
Epimedium
pubescens
Maxim.
或朝鲜淫羊藿
Epimedium
koreanum
Nakai
的干燥叶
[1]
，具有补肾阳、强筋骨、祛风湿的作用，是最常用的补肾和抗
风湿药之一
[2]
。研究显示，淫羊藿中含有大量的黄酮类成分，主要为异戊烯基类黄酮，一般认为异戊烯基黄酮及其苷类为淫羊藿的主要活性成分
，
如淫羊藿苷、朝藿定
A
、朝藿定
B
和朝藿定
C
等
[2-5]
。中药所含的化学成分是其发挥临床疗效的物质基础，明确淫羊藿药材中化学成分对其临床疗效的保证以及质量控制非常重要。
超高效液相色谱
-
质谱联用技术（
UPLC-MS
）已被广泛应用于中药化学成分的快速鉴定、药物质量控制等多个研究领域
[6-7]
，可通过将
LC-MS
扫描的碎片离子信息和化合物裂解规律与对照品或文献比对来快速、准确地分析中药中所含化学成分
[8
-9]
。淫羊藿中不同母核结构的化学成分在
ESI-MS
中有不同的特征碎片，可根据碎片离子特征和裂解规律
鉴定其所含的化学成分。本实验采用
UPLC-Q-TOF- MS
技术对淫羊藿饮片进行检测，通过与对照品或文献报道比对鉴定其中的化学成分；并通过
10
批样品化学成分的鉴定结果，确定其中普遍存在的化学成分，为阐明淫羊藿药效物质基础、提高其质量控制水平奠定了实验基础。
1
仪器与材料
Waters Acquity
TM
超高效液相系统、
Waters Xevo
TM
QTOF MS
系统（美国
Waters
公司）；
KDM
型电热套（山东省鄄城县新华电热仪器厂）；
RE-52AA
型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；
Sartorious BT25S
型十万分之一电子分析天平（赛多利斯公司，德国）。
色谱纯乙腈、甲酸购于
Acros
公司（比利时）；纯净水为屈臣氏蒸馏水；其他分析纯试剂购于天津康科德科技有限公司。对照品金丝桃苷（批号
PCM-LBM-001
）购于天津士兰科技有限公司；朝藿
定
A
（批
号
110623-150105
）、淫羊藿苷
I
（批号
56725-141019
）和脱水淫羊藿素（批号
38226-141120
）购于南京春秋生物工程有限公司；淫羊藿苷（批号
MUST-13120510
）、朝藿定
B
（批号
MUST-14062312
）、朝藿定
C
（批号
MUST- 14022312
）和宝藿苷
I
（批号
MUST-14042211
）购于成都曼斯特生物科技有限公司；新绿原酸（批号
140322
）和隐绿原酸（批号
140921
）购于上海融禾医药科技有限公司；各对照品质量分数均大于
98%
。
10
批淫羊藿饮片均购于原产地，其药材来源及产地信息见表
1
，饮片标本保存于天津中医药大学科研实验室。
2
方法
2.1
供试品溶液的制备
称取淫羊藿饮片粗粉
10 g
，加入
100 mL 50%
乙醇回流提取
1 h
，滤过，滤渣再加入
80 mL 50%
乙醇回流提取
0.5 h
，滤过，合并
2
次滤液，定容至
200 mL
，
4
℃保存，备用。进样前用
50%
乙醇稀释成生药质量浓度为
0.01g/mL
的样品溶液，用
0.22 μm
微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
2.2
对照品溶液的制备
精密称取金丝桃苷
1.03 mg
、淫羊藿苷
1.01 mg
、朝藿定
A 1.01 mg
、朝藿定
B 1.00 mg
、朝藿定
C 0.99 mg
、宝藿苷
I 1.02 mg
、淫羊藿苷
I 1.01 mg
、脱水淫羊藿素
0.98 mg
、新绿原酸
1.03 mg
和隐绿原酸
0.99 mg
置于
10 mL
量瓶中，加入
50%
乙腈溶解定容至刻度，配制成对照品储备溶液。随后取
1 mL
该储备溶液稀释定容至
10 mL
，配制成含金丝桃苷
10.3 μg/mL
、淫羊藿苷
10.1 μg/mL
、朝藿定
A 10.1 μg/mL
、朝藿定
B 10.0 μg/mL
、朝藿定
C 9.9 μg/mL
、宝藿苷
I 10.2 μg/mL
、淫羊藿苷
I 10.1 μg/mL
、脱水淫羊藿素
9.8 μg/mL
、新绿原酸
10.3 μg/mL
和隐绿原酸
9.9 μg/mL
的混合对照品溶液，
0.22 μm
微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
2.3
色谱条件
色谱柱为
Waters Acquity UPLC BEH C
18
（
100 mm
×
2.1 mm
，
1.7 μm
；
Waters
，美国）；流动相
A
为
0.1%
甲酸
-
水溶液，流动相
B
为
0.1%
甲酸
-
乙腈溶液，洗脱梯度：
0
～
0.5 min
，
2% B
；
0.5
～
1.5 min
，
2%
～
10% B
；
1.5
～
3.5 min
，
10%
～
20% B
；
3.5
～
6.5 min
，
20%
～
35% B
；
6.5
～
12 min
，
35%
～
40% B
；
12
～
13 min
，
40%
～
50% B
；
13
～
15 min
，
50%
～
75% B
；
15
～
16 min
，
75%
～
95%
；
16
～
17 min
，
95% B
；体积流量
0.4mL/min
，柱温
35
℃，进样量
5μL
。
2.4
质谱条件
采用电喷雾电离源（
ESI
）在负离子模式下采集数据，扫描范围
m
/
z
50
～
1 000
；喷雾电压
3.0 kV
，干燥气体积流量
800L/h
，温度
350
℃；雾化气压力
2 413 kPa
；雾化气为高纯氮气，碰撞气为高纯氩气，选取
[M
－
H]
−
m
/
z
554.261 5
的亮氨酸
-
脑啡肽进行精确质量数校正，数据由
MassLynx v4.1
（
Waters Corporation
，
MA
，
USA
）工作站采集。
2.5
数据处理
查阅国内外淫羊藿及其同科属植物化学成分研究相关文献，收集整理了淫羊藿中化学成分信息，建立包括化合物中文名、英文名称、结构式、分子式、精确相对分子质量以及特征碎片的淫羊藿化学成分文献信息。通过与对照品和整理的化学成分文献信息比对，分析化学成分的质谱信息，从而对检测到的化合物进行鉴定。
3
结果
3.1
化学成分鉴定
按照“
2.1
”项下方法制备供试品溶液，按“
2.3
”和“
2.4
”项下的色谱和质谱条件对淫羊藿饮片进行
UPLC-Q-TOF-MS
分析，所得样品的原始基峰离子（
BPI
）色谱图见图
1
，对图中所示的
29
个成分进行了指认。
3.1.1
脱水淫羊藿素母核结构的黄酮类化合物
淫羊藿中该类黄酮化合物（类型
A
）
B
环的
C-4′
位由
-OCH
3
取代，糖基取代发生在
C-3
位或
C-7
位
[10]
。在
ESI-MS
裂解过程中主要发生脱糖基、脱水等中性分子丢失；在负离子模式下，更容易失去
7-
位糖基产生基峰离子，而苷元离子较难进一步裂解
[11]
。因此，将苷元离子
m
/
z
367
作为鉴别该类化合物的特征离子。据此规律鉴定出该类化合物
23
个，以化合物
9
为例说明鉴定过程，其他化合物的鉴定结果如表
2
所示。
化合物
9
（
t
R
＝
6.18 min
）在一级质谱中裂解产生的基峰离子为
m
/
z
675
，此外还存在明显的
m
/
z
837
离子，在二级质谱中产生碎片离子
m
/
z
367
。可发现该化合物的质谱行为与朝藿定
A
对照品一致，故将其鉴定为朝藿定
A
。推测化合物
9
在质谱中的裂解过程：
[M
－
H]
−
离子
m
/
z
837
，分子式为
C
39
H
50
O
20
，失去
1
分子葡萄糖形成基峰离子
m
/
z
675 [M
－
H
－
glu]
−
离子，离子
m
/
z
675
同时失去
1
分子葡萄糖和鼠李糖后产生母核离子
m
/
z
367 [M
－
H
－
glu
－
glu
－
rha]
−
，这也与文献报道一致
[3]
，故化合物
9
确定为朝藿定
A
。
3.1.2
去甲基脱水淫羊藿素母核结构的黄酮类化合物
淫羊藿中该类黄酮化合物（类型
B
）
B
环
C-4′
由
-OH
取代，该类化合物间的主要差异也是糖基取代的不同，取代方式主要为
3-
O
-
、
7-
O
-
或
3,7-
O
-
双取代
[3
,11]
。在
ESI-MS
中主要发生脱糖基、脱水等中
性分子丢失，特征离子为母核离子
m
/
z
353
离子。据此规律，共鉴定出该类化合物
6
个，以化合物
19
为例简述鉴定过程，其他该类化合物的鉴定结果见表
2
。
化合物
19
（
t
R
＝
8.21 min
）在
ESI-MS
中裂解主要产生
m
/
z
499
和
