我们分析不重现的原因，主要有三个：
①仪器系统差异的问题；
②色谱柱间的差异问题；
当我们的色谱数据出现不能重现的情况时，可以根据具体的情况进行相应地排查。
我们首先排查仪器系统，如果是由于更换色谱仪器，导致不能重现，那么我们就要看一下系统的状态是否正常。
仪器的校验记录：泵的精度、梯度曲线是否正常，以及使用和维修保养记录。
色谱柱是否放于柱温箱中，一般的柱温箱设置温度高于室温
5
℃以上才会比较稳定。
仪器的柱前混合体积比较大，导致流动相混合比例滞后，会影响梯度洗脱条件下的保留时间。看下图，前一张的液相仪器两相混合器的体积是20
0µL，出峰时间在17min，后一张图液相仪器的混合器体积是1000µL，出峰时间在20min。
如果是由于更换色谱柱导致不能重现，那么就是色谱柱间的差异问题，同一种键合相（如
C18
），不同厂家的会不一样，同一厂家的也有很多款（
C18
），即使同一款色谱柱，还有批次差异问题。
但一般情况下，同一款色谱柱，批次差异都是比较小的，除非方法的稳定性较差，或者是样品的保留行为对色谱条件比较敏感，所以方法建立时，新建方法的惰性很重要。
1）分析可离子化的化合物时，未在流动相中使用缓冲盐，或盐浓度不足。
2）流动相的pH与待分析物的pKa接近。具体请参考
反相色谱流动相pH的选择。
3）对流动相比例敏感，尽量使用同一台仪器，或者流动相预混并记录好具体混合方法，包括试剂的添加顺序，甚至记录量取时的试剂温度。
4）缓冲溶液的pH须在加入有机相前进行调节。
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