今天要给你们这些新入学的孩子们好好科普一下啥是circRNA。
circRNA是啥?就是环状RNA,是不是觉得很厉害,觉得最近才发现这玩意呢?其实也不是,早在1969年,就发现有这样的RNA了。那时候有个叫Diener的人,用电镜发现了马铃薯纺锤块茎病(potato spindle tuber disease)的病株上,有形成闭合环状的RNA。
这个时候发现的,其实就是所谓的类病毒(Viroids),一些没有蛋白外壳,但是能致病的东西。
当然,这和我们现在说的circRNA还是有一定区别的。我们现在研究的circRNA是可变剪接的结果。首先,我们要知道,mRNA形成的过程中,先要剪掉内含子,然后再把外显子接到一起:
当然,这种剪接的过程中,“接”这步是会出现变化的,那就会形成很多剪接异构体:
有时候是DNA模板本身某个外显子加倍,会导致接出来的mRNA变成这样,中间有重复外显子:
有时候是两条RNA在混剪的时候发生了鬼畜:
这种剪接的异构,特别是像上图这样Exon2的头,会接到Exon3的尾上去的这种现象,很容易导致形成了这样的首尾相连:
也就是Exon2的5'端接到了Exon3的3'端上去:
于是,就产生了这样三种情况,环状的,正常的,有重复外显子的:
那要怎么样检测这三种RNA呢?下面是测序的方法告诉我们的:
RNAseq测序的话,会得到很多个Reads,也就是片段化的序列,这些序列会通过和整个基因组的比对,bia回原位,但是如果是环状的话,就会导致这个Reads的两头,bia到不同方向的位置上,虚线表示他们的连接。这样bia错的序列,就会被注释上是circRNA。
普通的检测,就是通过PCR。蓝儿,普通的引物进行circRNA的检测的话,和mRNA没啥区别。所有circRNA的引物是反向设计的,就像下面这样: