令人尖叫的15分牛文是如何炼成的？

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文献的标题为： A circ RNA protects the hearts from pathological hypertrophy and heart failure by targeting miR223 （回复 0420 可下载本文，一周有效）

通过文献的标题可以总结出两点：

1、miR-223可能与靶目标mRNA结合导致心肌肥大和心衰；

2、The CircRNA可作为microRNA sponge与miR223结合，靶目标mRNA得到释放，从而阻止心肌肥大和心衰。

假想图：

那么就一步一步的跟着作者，探索文中的奥秘。

本文一开始并没有开门见山的提到某个环状RNA，而是miRNA。

MiRNA-miR223

（1）分析阶段

利用miRNA microarray 技术分析出在被ISO诱导成功的小鼠中miR-223-5p的表达水平升高。

（2）初步验证阶段

在人和小鼠的心肌肥大和心衰的模型组织中，发现miR-223表达水平与对照组相比升高；

（3）进一步验证阶段

通过miR-223转基因小鼠和miR-223敲除的小鼠验证出miR-223作为内源性调节因子可导致心脏疾病的发生。同时在细胞机制中也得到了验证。

（4）结论

miR223可在体内诱导心肌肥大和心衰，在心肌细胞中诱导其发生心肌肥大。

miR223下游靶基因-ARC

（1）分析阶段

通过分析miR-223过表达时，表达水平下降的基因，同时miR-223敲除时，表达水平升高的基因，鉴定出下游靶基因mRNA-ARC。

（2）初步验证

通过RNAhybird bioniformatic program 验证miR-223可与ARC的 3，非翻译区（3，UTR）区相结合。

（3）进一步验证

利用Target protector technology 验证miR-223可与ARC的 3，非翻译区（3，UTR）的结合是特异性的。

（4）进一步功能验证

通过 adenovirus harbouring ARC without 3，UTR 技术并在ISO诱导下发现心肌肥大和心衰的能力下降；并且在ARC transgenic mice中发现，在ISO诱导下也不能导致心肌肥大和心衰；

应用bitransgenic mice (223/ARC without 3，UTR ）技术发现心肌肥大和心衰的症状得到改善，而且心肌细胞的凋亡程度减少。

（5）结论

靶基因ARC可以阻断心肌细胞的肥大和心衰，及阻止心肌细胞的凋亡。

以上两部分可充分证明由标题总结出的第一点，miR-223可与靶目标ARC的3，UTR区结合导致心肌肥大和心衰。

CircRNA(HRCR)与miRNA-miR223

（1）分析阶段

在circBASE数据库中随机筛选出100个circRNAs，并用qRT-PCR技术通过引物验证出其中在心脏中的环状RNA，并最后在心肌肥大和心衰小鼠模型中验证出mm9-circ-012559（HRCR）的表达水平下降。

（2）初步验证

利用RNAhybird技术发现HRCR与miR223有6个结合位点；

利用biotin-coupled和pull down技术相互验证HRCR与miR223可以相互沉降下来；

（3）进一步验证

利用AGO2 IP技术在miR223转染的细胞中可沉降大量的 circ-HRCR。

FISH探针技术验证circRNA（HRCR）可与miR223在细胞浆中结合。

结论： circRNA（HRCR）可与miR223结合。

（4）更进一步验证阶段

CircRNA(HRCR)与mRNA-ARC的关系：

当HRCR过表达时，ARC的表达水平下降；

当HRCR水平下降时，ARC的表达水平升高；

在心肌细胞中，HRCR过表达时，在ISO诱导下，心肌细胞肥大的情况受到了抑制；而且HRCR的这种抑制作用在ARC缺失的情况下会受到压制。

（5）结论

HRCR可以作为内源性miR223的海绵RNA调节ARC的表达水平和活性。

最后，作者通过在ISO诱导的小鼠中，过表达HRCR，表明HRCR能够抑制心肌细胞肥大和心衰。

以上第三部分可充分证明由标题总结出的第二点，HRCR可以作为内源性miR223的海绵RNA调节ARC的表达水平和活性，从而阻止心肌肥大和心衰。

以上便是逆常规思维分析的circRNA在疾病发生和发展中的作用 ，本文首尾呼应，首先提出mircroRNA miR223具有导致心肌肥厚和心衰中的功能，在文章的最后又提出circRNA有抑制心肌肥厚和心衰的功能，不愧是15分的大作。

参考文献：Wang K,Long B,Liu F,et al.A circular RNA protects the heart from pathological hypertrophy and heart failure by targeting miR-223.Eur Heart J 2016;37:2602-2611.DOI:10.1093/eurheartj/ehv713