专栏名称: 解螺旋
解螺旋——医生科研最好的帮手。无论你是科研零基础,抑或初窥门径,你都可以在解螺旋获得极大的提升,从而面对基金、论文、实验游刃有余。解螺旋课堂是所有热爱科研技能学习的医生聚集地,解螺旋会员是医生科研全方位的贴心助手,加入我们,体验改变。
目录
相关文章推荐
贝壳社  ·  RNA疗法,或将终结“乙肝”市场 ·  2 天前  
第十一诊室  ·  这种半永久文秀,千万别试!风险真的大 ·  5 天前  
新机器视觉  ·  显微镜分辨率与相机分辨率 ·  6 天前  
51好读  ›  专栏  ›  解螺旋

令人尖叫的15分牛文是如何炼成的?

解螺旋  · 公众号  · 医学  · 2017-04-20 17:57

正文

科研经验 | 文献 | 实验 | 工具 | SCI写作 | 国自然

作者:亢小玉(转载请注:解螺旋·医生科研助手)


文献的标题为:A circ RNA protects the hearts from pathological hypertrophy and heart failure by targeting miR223(回复0420可下载本文,一周有效)


通过文献的标题可以总结出两点:


1、miR-223可能与靶目标mRNA结合导致心肌肥大和心衰;

2、The CircRNA可作为microRNA sponge与miR223结合,靶目标mRNA得到释放,从而阻止心肌肥大和心衰。


假想图:


那么就一步一步的跟着作者,探索文中的奥秘。


本文一开始并没有开门见山的提到某个环状RNA,而是miRNA。


MiRNA-miR223


(1)分析阶段


利用miRNA microarray 技术分析出在被ISO诱导成功的小鼠中miR-223-5p的表达水平升高。


(2)初步验证阶段


在人和小鼠的心肌肥大和心衰的模型组织中,发现miR-223表达水平与对照组相比升高;


(3)进一步验证阶段


通过miR-223转基因小鼠和miR-223敲除的小鼠验证出miR-223作为内源性调节因子可导致心脏疾病的发生。同时在细胞机制中也得到了验证。


(4)结论


miR223可在体内诱导心肌肥大和心衰,在心肌细胞中诱导其发生心肌肥大。



miR223下游靶基因-ARC


(1)分析阶段


通过分析miR-223过表达时,表达水平下降的基因,同时miR-223敲除时,表达水平升高的基因,鉴定出下游靶基因mRNA-ARC。


(2)初步验证


通过RNAhybird bioniformatic program 验证miR-223可与ARC的 3,非翻译区(3,UTR)区相结合。


(3)进一步验证


利用Target protector technology 验证miR-223可与ARC的 3,非翻译区(3,UTR)的结合是特异性的。


(4)进一步功能验证


通过 adenovirus harbouring ARC without 3,UTR 技术并在ISO诱导下发现心肌肥大和心衰的能力下降;并且在ARC transgenic mice中发现,在ISO诱导下也不能导致心肌肥大和心衰;


应用bitransgenic mice (223/ARC without 3,UTR )技术发现心肌肥大和心衰的症状得到改善,而且心肌细胞的凋亡程度减少。


(5)结论


靶基因ARC可以阻断心肌细胞的肥大和心衰,及阻止心肌细胞的凋亡。



以上两部分可充分证明由标题总结出的第一点,miR-223可与靶目标ARC的3,UTR区结合导致心肌肥大和心衰。


CircRNA(HRCR)与miRNA-miR223


(1)分析阶段


在circBASE数据库中随机筛选出100个circRNAs,并用qRT-PCR技术通过引物验证出其中在心脏中的环状RNA,并最后在心肌肥大和心衰小鼠模型中验证出mm9-circ-012559(HRCR)的表达水平下降。


(2)初步验证


利用RNAhybird技术发现HRCR与miR223有6个结合位点;


利用biotin-coupled和pull down技术相互验证HRCR与miR223可以相互沉降下来;


(3)进一步验证


利用AGO2 IP技术在miR223转染的细胞中可沉降大量的 circ-HRCR。


FISH探针技术验证circRNA(HRCR)可与miR223在细胞浆中结合。


结论:circRNA(HRCR)可与miR223结合。


(4)更进一步验证阶段


CircRNA(HRCR)与mRNA-ARC的关系:


当HRCR过表达时,ARC的表达水平下降;

当HRCR水平下降时,ARC的表达水平升高;


在心肌细胞中,HRCR过表达时,在ISO诱导下,心肌细胞肥大的情况受到了抑制;而且HRCR的这种抑制作用在ARC缺失的情况下会受到压制。


(5)结论


HRCR可以作为内源性miR223的海绵RNA调节ARC的表达水平和活性。


最后,作者通过在ISO诱导的小鼠中,过表达HRCR,表明HRCR能够抑制心肌细胞肥大和心衰。


以上第三部分可充分证明由标题总结出的第二点,HRCR可以作为内源性miR223的海绵RNA调节ARC的表达水平和活性,从而阻止心肌肥大和心衰。



以上便是逆常规思维分析的circRNA在疾病发生和发展中的作用,本文首尾呼应,首先提出mircroRNA miR223具有导致心肌肥厚和心衰中的功能,在文章的最后又提出circRNA有抑制心肌肥厚和心衰的功能,不愧是15分的大作。


参考文献:Wang K,Long B,Liu F,et al.A circular RNA protects the heart from pathological hypertrophy and heart failure by targeting miR-223.Eur Heart J 2016;37:2602-2611.DOI:10.1093/eurheartj/ehv713


长按识别下方二维码添加文献菌为好友,直接提问和深入交流。

报名文献精读班,每周视频学文献,请点下图

投稿邮箱: [email protected]

合作微信:helixlife6