诺华开发pCAD／CDH17双抗ADC！

On target off tumor 毒性无论对于 TCE 还是 ADC ，都在一定程度上影响药物的药效，而对于 TCE ，这一问题一直以来阻碍了其在实体瘤的进展。而双靶向双特异抗体理论上可以通过亲和力差异化设计在一定程度上解决该问题。最近，来自于诺华的研究者在 mabs 发表文章，开发靶向 pCAD 和 CDH17 双抗 ADC ，其通过筛选亲和力差异化的双抗，在一定程度上促使 ADC 药物特异性靶向 pCAD 和 CDH17 的肿瘤细胞。

首先看看诺华为什么选择这两个靶点 ， 研究者评估 CDH3 （编码 pCAD 的基因）和 CDH17 在人类正常组织和癌症样本中 mRNA 水平，分析显示， CDH3 mRNA 在包括结直肠癌（ CRC ）在内的多种实体瘤中过表达，而在正常食管、皮肤、前列腺和生殖组织中表达水平适中（图 1a i ）。 CDH17 mRNA 同样在包括胰腺癌和胃癌在内的几种胃肠道实体瘤以及 CRC 中过表达。在正常组织中， CDH17 mRNA 在大肠和小肠中表达水平适中（图 1a ii ）。这些结果基本上和 Tabula Sapiens 公开可用单细胞 RNA 测序（ scRNAseq ）数据一致： CDH3 RNA 表达在多种组织中广泛存在，而 CDH17 表达主要在小肠和大肠中。对 CRC 患者的公开可用 scRNAseq 数据集分析发现， CDH3 和 CDH17 双表达群体主要局限于癌细胞，在正常组织中观察到的双阳性表达极少（图 1b ），这也结果也在 IHC 染色中的得到印证。

双抗裸抗筛选策略 ： 在确定 CDH17 基本上肿瘤中表达，而在正常组织中仅限于大肠和小肠中，而 pCAD 更多正常组织中表达后，诺华的研究者的筛选目的很明确：通过靶向 CDH17 引导抗体到肿瘤部位，再利用靶向 pCAD 增强抗体对肿瘤的共定位作用，从而降低 pCAD 的毒性。

首先是基于亲和力和活性，筛选单价和双价具有差异的抗体，即抗体在双价下具有较好的亲和力和抑制活性，而在单价状态下亲和力较低或者抑制活性较低。

在获得 7 个候选的 CDH17 抗体后，研究者和 pCAD 抗体组合成 1+1 的双抗，以检测这些候选抗体是否在双抗结构中保持了其在单价的性质。结果表明，在仅表达 CDH17+ 的肿瘤细胞上，其结合活性相对较低，在仅表达仅 pCAD+ 肿瘤细胞上其结合活性中等，在两个靶点双表达的细胞上，抗体结合活性最强。

pCAD 单抗改造 ： pCAD 单抗的筛选主要是 解决其在仅表达 pCAD 的细胞上依然具有活性问题，从而减低减 pCAD 在正常组织的毒性。研究者改造抗体主要是通过丙氨酸扫描突变 CDR3 来调整 pCAD 臂的亲和力。通过亲和力变化，研究者挑选了亲和力降低低中高的三个变体进行候选双抗测试（ 8 、 9 、 10 双抗）。通过双抗的抑制活性测序，研究者最终选择了 10 号双抗作为候选双抗进行 ADC 研究，因为其在单靶点表达的肿瘤细胞中活性最低，而在双表达的肿瘤细胞中具有较强的活性。

CDX 模型检测双抗 ADC 活性 ： 在 CDX 模型中，研究者采用了一种创新型的模型。在动物两侧接种不同的肿瘤细胞，靶点单表达或者靶点双表达的肿瘤细胞。在此基础上，再进行双抗 ADC 给药（其中 BsAb5 为改造前的抗体， BsAb10 是目的双抗）。结果表明，相对于改造前的双抗，改造后的双抗构建的 ADC 对双表达的肿瘤细胞具有较强的抗肿瘤活性，而对于单表达 pCAD 的肿瘤细胞，几乎没有活性，而对于单表达 CDH17 的肿瘤细胞，其活性强于 pCAD 。