第66届美国血液学年会（ASH）将于2024年12月7日~10日在美国圣地亚哥召开。ASH作为全球血液学工作者的盛会，每年都会公布和发表世界各国的最新血液学进展。届时将汇集各国知名血液病学专家，分享全球最前沿的研究进展和突破性临床数据，更新全球突破性临床数据。
Htology血液前沿
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标题：Development of a First-in-Class CAR-T Therapy Against Calreticulin-Mutant Neoplasms and Evaluation in the Relevant Human Tissue Environment
抗钙网蛋白突变肿瘤的首创CAR-T疗法的开发以及相关人体组织环境的评估
骨髓增殖性肿瘤（MPNs）的特点是富含TGFβ且具有纤维化特征的肿瘤微环境（TME），这给靶向免疫疗法带来了挑战。目前的治疗方法主要是姑息性的，并不能特异性地靶向MPN克隆。在约1/3的患者中，MPNs是由突变型钙网蛋白（mutCALR）驱动，该突变蛋白与血小板生成素受体（TpoR）结合后导致其激活，并在表达TpoR的细胞——即造血干细胞/祖细胞（HSPCs）和巨核细胞表面显著展示这种肿瘤新抗原。靶向mutCALR的双特异性和抑制性抗体最近已经进入了临床试验阶段。本文介绍了首个以mutCALR为靶点的嵌合抗原受体T细胞（CAR-T）疗法的临床前验证情况，包括其在相关临床环境中的有效性。
杀伤效果和靶细胞TpoR表达通过流式细胞术进行评估。为了在相关的肿瘤微环境中评估CAR-T细胞，研究人员使用单细胞RNA测序（scRNAseq）分析了与CAR-T细胞共同移植的人类骨髓器官模型，该模型来源于iPSC，并与患者来源的CD34+ HSPCs以及骨髓纤维化生态位中丰富的免疫调节因子（TGFβ和半乳糖凝集素-1，Gal1）共同输注。
这种新型CAR-T细胞在体外对低表达和高表达mutCALR的人类细胞系表现出强大且高度选择性的清除效果。在移植了mutCALR TpoR AML细胞的NSG小鼠中，CAR-T细胞的给药显著降低了白血病负担并提高了生存率。CAR-T细胞在骨髓中的良好浸润以及几乎完全消除白血病的结果，证实了其在体内对mutCALR恶性肿瘤的显著疗效。
CAR-T细胞的有效性在来自12名MPN患者的CD34+
HSPCs
上进行了检测
，这些患者包括骨髓纤维化、原发性血小板增多症（ET）以及加速期/急变期MPN（AP/BP-MPN），并且包含了ins5和del52两种突变类型（n=8）。
在二维和三维培养中观察到HSPCs的出色清除效果（40%~＞90%），并且具有极高的特异性，对JAK2V617F+
样本（n=4）的杀伤作用非常有限。
AP/BP-MPN HSPCs的杀伤效果明显低于慢性期样本（骨髓纤维化/ET），并且与表面TpoR表达水平较低相关。
研究
假设，使用TpoR激动剂
治疗可能会通过促进巨核细胞分化来增加AP/BP-MPN HSPCs表面的TpoR表达。
检测
了多次剂量的重组人血小板生成素（rhTPO）和TpoR激动剂。
用艾曲波帕（Eltrombopag）预处理细胞（而非罗米司亭或rhTPO）可使表面TpoR表达增加超过50%，并提高CAR-T细胞的杀伤效果，这证实了药理学增强TpoR表达可能增加对抗
mutCALR免疫疗法的敏感性。
正如预期
，CAR-T细胞的杀伤效果
在临床相关浓度的JAK抑制剂长时间暴露下显著降低，细胞毒性和CAR-T细胞增殖都有大幅下降。
然而，CAR-T细胞在接触靶细胞前预先用峰值血浆等效剂量的JAK抑制剂孵育24小时，仅导致杀伤效果的小幅下降，范围从
＜
10%~
40%。
效力较低
的JAK1抑制剂显示出杀伤效力仅有轻微下降，这表明选择特定的JAK抑制剂或给药方案，或者短时间的洗脱期，可能与CAR-T治疗协同使用。
