看着这宽敞明亮的实验室，动辄几十万、上百万的仪器。
是不是想想自己能在里面工作就hin激动呢？
欣赏完实验室，下面就要开始上手了。
咱们第一次先从最基础的来，
实验室灭菌方法详解
首先要明确灭菌的重要性，往轻了说，我们进入实验室会接触到很多分子生物学实验。会有一些像细胞间一样要求完全无菌的环境，一旦有微生物存在，我们的几个星期甚至几个月的心血便都会付之东流。往重了说，一些动物解剖实验中，实验动物可能携带高致病菌，对人体会有极大危害，所以实验室第一步灭菌，万万要认真。
提到高温灭菌，相信大家日常生活中都应该用过祖传的万能100度法，买个新的餐具啦，水杯啦，都会习惯性的拿开水烫一烫，意在消毒，这的确也是有一定科学依据的。高温使微生物的蛋白质及酶发生凝固或变性而死亡，是应用最广泛且有效的灭菌方法。下面我们说两种方法。
用高温加高压灭菌，不仅可杀死一般的细菌，对细菌芽胞也有杀灭效果，是最可靠、应用最普遍的灭菌法。
生活中，我们可能是这样
当然实验室里，我们肯定更专业
图为实验室常用的高压灭菌锅
一大波专业名词来袭↓↓
高压蒸气灭菌器的类型和样式较多，如：①下排气式压力蒸气灭菌器是普遍应用的灭菌设备，压力升至102.9kPa，温度达121～126℃，维持20～30分钟，可达到灭菌目的。②脉动真空压力蒸气灭菌器已成为目前最先进的灭菌设备。灭菌条件要求：蒸气压力205.8kPa，温度达132℃以上并维持10分钟，即可杀死包括具有顽强抵抗力的细菌芽胞在内的一切微生物。
包裹的物品不宜太大，一般应小于30cm×30cm×50cm，大于该尺寸需要酌情延长灭菌时间；
1.高压锅内的包裹不要排得太密，以免妨碍蒸气透入，影响灭菌效果；
2.对塑料制品不宜放置过于拥挤，以免发生形变；
3.压力、温度和时间达到要求时，指示带上和化学指示剂即应出现已灭菌的色泽或状态；
4.锐性器械，如刀、剪不宜用此法灭菌，以免变钝；
5.瓶装液体灭菌时，如有塑料瓶盖要适当旋松瓶盖，并用牛皮纸或纱布包扎瓶口；如有橡皮塞时，应插入针头排气，切记要保持瓶内外的连通，防止高温膨胀爆裂；
6.注明灭菌日期和物品保存时限，一般可保留1～2周；
7.应有专人负责，每次灭菌前，应检查安全阀的性能，以防压力过高发生爆炸，保证安全使用。
干热适用于易被湿热损坏和在干燥条件下使用更方便的物品（如金属、玻璃、陶瓷及凡士林纱布条等）灭菌。由于其对烤箱要严格要求（国内产的烘箱质量都有点悬），且大功率、高温下危险系数较大，一般不建议使用！
当然我们不是这么像军训时的太阳
那样干热
而是，当当当当~
灭菌条件为：160℃维持2小时；170℃维持1小时；180℃维持30分钟；特殊情况下，如需要灭活器械、容器中对于温度超级稳定的RNase时，才考虑使用（其实也可以DEPC预处理器械、容器、溶剂等，然后湿热灭菌！）。
1.对灭菌对象的理化性质有一定了解，明确对象在高温下的稳定性；
2.对设备的情况、参数有清醒认识，了解设备的温度设计上限；
3.专项供电，确保接入电路足够负荷；
4.灭菌过程中，相关人员要实时在岗监管，不得离岗，如遇特发情况及时切断电源！
过滤是物理阻留的方法将细菌除去，适用的是热不稳定试剂。不要以为是物理法就除不干净细菌，我们用的可是孔径为0.22μm的微滤膜，甚至是孔径更小的纳滤膜(孔径可达20 -50nm )。
当然，孔径小，流速自然也就慢一些，所以我们一般用小孔径滤膜过滤之前会使用大孔径的滤膜进行预过滤。
用的就是下面这个像串联一样的系列仪器~
在正式过滤前，必须进行过滤系统的密闭性和滤膜的完整性测试。过滤过程要在等级A的洁净室内进行（通常可在超净台完成）。
从左到右分别是X-射线、紫外光。可见光、红外光，光的波长依次递增。常用的杀菌波长254纳米位于紫外光中远紫外线（UVC）波段。
紫外线的定义是波长在10纳米到400纳米之间的电磁辐射。不过在实际应用中，我们一般使用的波长一般在100纳米以上。我们日常看到的一些饭店里的碗筷柜里或者一些食品加工的地方用的紫色的灯就是用的这种方法。
总的来说，紫外线的穿透能力比较差，通常也就能穿透两三厘米的厚度。但如果用在某些物质短时间灭菌，效果还是很好的。
1.选择紫外灯时，应该仔细核对型号、适用范围和注意事项。不要进入开启紫外消毒灯的室内。千万不要对着消毒灯验钞或者观察荧光，任何时候都不应该直视紫外灯管。紫外灯应该尽可能只在封闭空间内小范围使用，并避免不必要的暴露
2.在使用过程中，应保持紫外线灯表面的清洁，一般每两周用酒精棉球擦拭一次，发现灯管表面有灰尘、油污时，应随时擦拭
3.用紫外线消毒物品表面时，应使照射表面受到紫外线的直接照射，且应达到足够的照射剂量
（1）浸泡法 选用杀菌谱广、腐蚀性弱、水溶性消毒剂，将物品浸没于消毒剂内，在标准的浓度和时间内，达到消毒灭菌目的。
（2）擦拭法 选用易溶于水、穿透性强的消毒剂，擦拭物品表面，在标准的浓度和时间里达到消毒灭菌目的。
（3）薰蒸法 加热或加入氧化剂，使消毒剂呈气体，在标准的浓度和时间里达到消毒灭菌目的。
适用于室内物品及空气消毒或精密贵重仪器和不能蒸、煮、浸泡的物品（血压计、听诊器以及传染病人用过的票证等），均可用此法消毒。
（4）喷雾法 借助普通喷雾器或气溶胶喷雾器，使消毒剂产生微粒气雾弥散在空间，进行空气和物品表面的消毒。
（5）环氧乙烷气体密闭消毒法 将环氧乙烷气体置于密闭容器内，在标准的浓度、湿度和时间内达到消毒灭菌目的。
火火火火火~
是指用火焰直接烧灼的灭菌方法。该方法灭菌迅速、可靠、简便，适合于耐火焰材料（如金属、玻璃及瓷器等）物品与用具的灭菌，不适合药品的灭菌。
最常见的火焰灭菌，酒精灯。
图为加热接种环
注意
1、酒精灯的灯芯要平整.
2、添加酒精时,不超过酒精灯容积的2/3；酒精不少于1/4.
3、绝对禁止向燃着的酒精灯里添加酒精,以免失火.
4、绝对禁止用酒精灯引燃另一只酒精灯. 5、用完酒精灯,必须用灯帽盖灭,不可用嘴去吹. 6、不要碰倒酒精灯,万一洒出的酒精在桌上燃烧起来,应立即用湿布扑盖.
以上就是实验室常用灭菌方法，有了它们，实验室一切微生物统统不怕。
来源：“生命青年传媒中心”公众号
作者：汪雨嘉
