WB的灰度值计算，你都会了吗？

当我们处理细胞之后，想看一下该处理对细胞中某一基因表达的影响，我们需要从蛋白水平来看一下该基因表达的蛋白的量的变化，那我们通常会做western blot，对蛋白进行半定量，通过对western blot结果的分析，我们可以知道该处理对基因的表达造成了什么影响。那我们做了western blot，扫膜得到结果之后就万事大吉了吗？

我想说这只是刚开始罢了，这时候我们得到的只是蛋白的条带，当然我们通过观察处理前后条带的深浅可以大概的判断该处理对基因的表达造成了什么影响。

但是这种判断是存在误差的，误差来源于我们上样的时候并不能保证每个加样孔的上样量都一样，所以我们不能只通过观察条带的深浅来判断该处理对基因的表达造成了什么影响。

我们接下来要做的就是对条带的灰度值进行计算并做统计，这样得到的结果才更加准确更有说服力。接下来我们就来谈谈如何利用Image J来计算条带的灰度值：

1、File——》open 打开WB片子

2、把图片转化成灰度图片 ：image——》type——》8-bit

3、消除背景影响：process——》subtract background 选择50基本可以。

4、选中矩形选项，圈中第一个条带，然后ctrl+1，然后将第一个条带上的矩形移动到第二个条带上 ，ctrl+2，然后到第三个条带，ctrl+2，直到最后一个条带，把所有条带都圈中之后，然后ctrl+3。

5、选中直线工具，将开口的波峰关闭。

6、选中魔棒工具，点击波峰可以显示波峰下面积，即条带的灰度值。

7、result——》file——》save，打开保存的result，进行统计分析：以内参为基数，其他数值与其比值为相对灰度值。

8、整理之后的结果为

计算出灰度值并统计分析，经整理后得到的结果图是不是感觉上升了一个档次呢，而且最主要的是这样得到的结果更精确更有说服力!