APSB（IF 14.7）：还有后续？瑞金医院陈赛娟等团队揭示莲花清瘟胶囊治疗新冠的动态免疫调节

方法

结果

该研究队列纳入了18至59岁的轻症COVID-19患者，并确保性别、BMI、种族、吸烟习惯和饮酒量在各组之间均衡，而有合并症的患者被排除。41名患者按2：1比例随机分为LHQW组和对照组，并分别接受LHQW胶囊+维生素C（VitC）治疗和仅VitC治疗。除此之外，研究还纳入了20名健康者进行比较分析（图2A）。研究使用质谱流式细胞术和RNA测序在3个时间点分析外周血样本，并用蛋白质组学检查血浆蛋白。结合发热、咳嗽、呼吸急促和疲劳等临床症状后，研究发现接受LHQW治疗的患者从第7天到第14天的症状恢复率显著高于对照组，表明 LHQW可能对加速轻症COVID-19患者的恢复具有积极效果（图1）。

通过使用39个表面标记的定制面板，研究基于t-SNE和FlowSOM方法鉴定出了43个不同的免疫细胞群落（图2B）。进一步利用CD45RA、CD45RO、CD62L等七种细胞表面标志物，研究识别出14个CD4+T细胞簇和9个CD8+T细胞簇（图2C，D）。在LHQW治疗后一周，研究发现T17和T26的频率明显下降，而T04在治疗两周后频率显著增加，表明LHQW可能抑制了病原性记忆Tregs的维持，并且促进了早期CD8+T细胞的活化，减少CD8+T细胞耗竭。除此之外，研究在NK细胞分析中识别出6个细胞亚群，并且NK03频率在LHQW治疗一周后显著下降，而其他亚群不变（图2E）。这些结果表明， LHQW可能通过阶段性调节T细胞活化和耗竭，从而增强对Omicron变种病毒的免疫反应。

在B细胞分析中，研究识别了4个B细胞亚群，其中B02和B04亚群在感染后频率增加并且在对照组中迅速下降，而LHQW组在治疗两周后仍保持较高的B02和B04频率（图2F）。鉴于MZB细胞（B02）在早期免疫应答的作用以及CCR7在激活体液免疫中的关键作用，两周的LHQW治疗可能会促进B细胞活化。此外，通过对LHQW治疗后频率发生显著改变的六个免疫亚群进行相关性分析，研究发现CD40 ^hi CCR7 ^hi naïve-like B细胞和MZB细胞在治疗前后均存在正相关，而在经过LHQW治疗一周后，免疫抑制性记忆Tregs和具有潜在免疫功能的naïve-like CD8+T细胞之间存在负相关（图2G）。这表明 LHQW具有减少免疫抑制并增强细胞免疫的能力，而这对于限制病毒感染至关重要。

为了更好地了解LHQW治疗后免疫变化背后的分子机制，研究对同一队列的PBMC样本进行了转录组测序分析。GSEA分析显示，LHQW组的糖酵解和低氧代谢途径相比对照组更为活跃，而Treg转录调控和CD8+T细胞衰竭等关键调控途径则更不活跃（图3A，B）。此外，在LHQW治疗两周后，B细胞活化和抗炎途径与LHQW组呈正相关（图3C）。对基因组变化的深入分析揭示了由LHQW驱动的抗炎反应的转变，具体表现为LHQW 组中抗炎基因的上调和促炎基因的下调（图3D）。蛋白质组分析结果显示，LHQW治疗组在治疗一周后血浆中b-NGF和KRT19等潜在不良COVID-19结果的生物标志物显著降低，CXCL11（招募Treg以减弱T细胞和NK细胞激活）和PLXNA4（负向调节T细胞激活的免疫检查点抑制剂）的水平也降低（图3E）。总之， LHQW治疗可以促进COVID-19患者早期CD8+T细胞活化，减少Treg，减轻炎症，降低CD8+T细胞衰竭，并促进B细胞活化。

研究对LHQW和对照组在V2和V3时间点的六个免疫细胞群（T17、T04、T26、NK03、B02和 B04）、四个基因（41BB、PD-L2、EBF1和NEIL1）以及两个血浆蛋白（CXCL11和b-NGF）的差异表达进行了相关性网络分析。在V2时，记忆性Tregs（T17）与naïve-like CD8+T细胞（T04）之间的相关性占主导地位，且CXCL11水平与T04频率以及4-1BB水平与T17频率之间相关性最强，表明LHQW初期的免疫调节重点在于T细胞活化（图4F）。到了V3，CXCL11与B04、T26和NK03之间的相关性最为显著，同时B02或B04与NEIL1或EBF1之间的相关性也增加，表明LHQW的调节效果在第二周转向B细胞活化（图4G）。这些结果表明 LHQW可能通过动态调整免疫反应来加速COVID-19患者的康复过程。

结论