本文介绍了一篇关于临床验证的研究，该研究针对胰腺癌中高表达的c-Met基因，设计了一种Car-M巨噬细胞。文章详细描述了实验过程，包括验证c-Met作为肿瘤靶标的假设、构建CAR质粒、实验验证等步骤。该研究的目的是利用Car-M巨噬细胞来识别和激活巨噬细胞，从而抑制胰腺癌的进展。
文章介绍了胰腺癌中c-Met基因的高表达情况，以及其与肿瘤生存区减少的关系。研究目的是验证c-Met作为肿瘤靶标的可行性，并设计一种Car-M巨噬细胞来抑制胰腺癌的进展。
研究首先分析了胰腺癌中c-Met的表达情况，并设计了Car-M巨噬细胞。通过构建CAR质粒，使巨噬细胞膜上表达嵌合抗原受体，以识别并激活巨噬细胞。为了验证靶向c-Met的Car-M巨噬细胞的效果，进行了体外和体内实验。
实验结果显示，靶向c-Met的Car-M巨噬细胞能够更有效地杀死肿瘤细胞，并提升对肿瘤细胞的吞噬能力。此外，与肿瘤细胞共培养后，靶向c-Met的Car-M巨噬细胞激活了免疫状态，并产生了相关的信号通路变化。
研究中使用了永生化的细胞系THP1和慢病毒制作靶向c-Met的Car-M巨噬细胞，存在潜在风险。为此，研究者换用人的原代巨噬细胞和腺病毒进行感染，生成Car-M巨噬细胞，并进行了验证，结果符合预期。
这篇文章为临床验证提供了一种新的思路，即通过设计Car-M巨噬细胞来靶向高表达的c-Met基因，从而抑制胰腺癌的进展。未来可以进一步探索这种方法的临床应用潜力，并优化实验策略以降低潜在风险。
今天这篇文章讲的偏向临床验证，还算是篇挺有意思的文章，这篇文章是北京协和医学院附属北京协和医院发表在27.7分的Mol Cancer上的。他们通过分析胰腺癌的高表达原癌基因c-Met的表达（c-Met作为一个原癌基因，也就是一种细胞膜表面的受体酪氨酸激酶，和MAPK信号通路、Ras信号通路和PI3K-AKT信号通路等等都有密切的关系，算是一个比较经典的肿瘤膜表面受体，不清楚这些信号通路都是什么的话，可以去看看《信号通路是什么鬼？》系列），设计了一款Car-M的巨噬细胞，我们就来看看他们是怎么做的吧：
首先他们分析了胰腺癌中，各个癌基因的表达，发现其中c-Met的表达明显增强，同时c-Met的表达与肿瘤的生存区减少有关。于是他们就提出了第一个假设，假设c-Met可以作为一个肿瘤较为理想的巨噬细胞靶标（这个假设提出的基础，就在于c-Met的表达情况，对于肿瘤来说c-Met的表达是特异性的，这就对靶向肿瘤提供了依据，不清楚课题假设提出的话，可以去看看《科研的推理和逻辑：从实验台到咖啡桌》）：
那么要怎么设计实验来验证呢？他们首先设计了Car-M，构建了一个CAR（嵌合抗原受体），这个抗原受体是包含了CD8α信号肽、CD19-ITAM共刺激结构域以及c-Met单链抗体的片段，这样可以使得这个嵌合抗原受体在巨噬细胞膜上表达去识别并激活巨噬细胞。另一方面，为了确认c-Met靶向的Car-M巨噬细胞能杀死肿瘤细胞，他们给实验用的肿瘤细胞也加上了mCherry的红色荧光。使用单核细胞THP1来感染慢病毒，使之形成c-Met靶向的Car-M巨噬细胞，用未处理的THP1来作为对照（通过处理的差异，来进行米勒五法的求异法分析，表明靶向c-Met的Car-M巨噬细胞所产生的杀死肿瘤的功能与普通的THP-1细胞不同，不清楚米勒五法的话，可以去看看《列文虎克读文献》和《科研的推理和逻辑：从实验台到咖啡桌》）。结果发现，c-Met靶向的Car-M巨噬细胞可以更好地杀死肿瘤细胞：
c-Met靶向的Car-M巨噬细胞对于肿瘤的吞噬能力，也得到了进一步的提升，可以看到这个红色荧光的就是肿瘤细胞，而GFP绿色荧光标记的则是靶向c-Met的Car-M巨噬细胞：
靶向c-Met的Car-M巨噬细胞和肿瘤细胞共培养后，又结合细胞毒性的化疗药物同时作用，也可以增强肿瘤细胞对于化疗药物的敏感性：
那么靶向c-Met的Car-M巨噬细胞和肿瘤细胞共培养后，会产生什么样的信号通路的激活呢？他们分析了共培养中培养基的细胞因子，以及共培养后巨噬细胞的转录组变化。结果发现，靶向c-Met的Car-M巨噬细胞和肿瘤细胞共培养后，巨噬细胞的炎症相关因子被激活（包含了Notch信号通路、TNF信号通路，cAMP信号通路等等，这些信号通路都与炎症因子有一定的关联性，不熟悉的话，可以去看看《信号通路是什么鬼？》系列），也就是说靶向c-Met的Car-M巨噬细胞和肿瘤细胞共培养后，激活了免疫状态：
接着就是体内实验了，通过胰腺癌小鼠的模型，验证了靶向c-Met的Car-M巨噬细胞对胰腺癌进展的抑制作用：
但THP1作为永生化的细胞系，再加上使用慢病毒来制作靶向c-Met的Car-M巨噬细胞，是有潜在风险的（有这样的风险，就需要调整原有的策略，也就是改变原有的假设，这个过程其实就是假设的迭代，由于已知THP1细胞产生的靶向c-Met的Car-M巨噬细胞，具有抗肿瘤的作用，那么通过假设的迭代，换成更安全一些的原代巨噬细胞可能也会有类似的效果，不清楚假设迭代的话，可以去看看《科研的推理和逻辑：从实验台到咖啡桌》、《列文虎克读文献》和《信号通路是什么鬼？》系列）。于是他们就重新换了一个思路，就是用人的原代巨噬细胞，改用腺病毒来进行感染，生成Car-M巨噬细胞，并进行了验证。结果也基本上都符合预期：
这个其实就是他们验证的靶向c-Met的Car-M巨噬细胞的作用机制思路，通过CAR质粒，促进巨噬细胞产生c-Met的嵌合抗原受体，从而达到结合高表达c-Met的胰腺癌肿瘤细胞上，激活巨噬细胞的作用：
这篇文章偏向于临床，做的工作也算是比较干净利落的，也算是巨噬细胞的一个比较有意思的思路。好了，今天就先策到这里吧，有兴趣的话可以看看原文，祝你们心明眼亮。
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