奇怪！蛋白marker条带为什么会「越来越窄」？

编辑 | 澹泊研究僧

来源 | NIRO（ID：NIRO-keyanmiao）

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看到这个蛋白marker条带，相信很多朋友应该遇到过吧！蛋白marker条带越来越窄，但又不知道是什么原因！

问了生物公司销售，大多数都会说 批次问题 ，然后更换一批次测试发现还是一样的，然后换了其他家的蛋白marker，发现突然变好了过段时间有出现蛋白marker条带变窄了。 更多 WB相关实验 可浏览 这几篇《 为什么跑WB实验每次上样需要煮「蛋白」 》、 《 打破「Western blot 玄学」就看这篇了 》、 《 qPCR实验和WB实验结果「不一致」 》。

那究竟是什么原因导致了呢？

如果是做WB实验经验丰富的朋友，一眼就能看出，这其实是 样品泳道和蛋白marker泳道的体积差异太大(理论上为离子浓度差异大)，使得泳道离子浓度大就会出现蛋白marker越来越细的原因 ， 这通常发生在样品处理不当或离子浓度调节不准确的情况下。 一般 用蛋白 Loding buffer稀释一些1×Loading  buffer，把marker的体积补齐即可。

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除此之外，还有其他因素也有可能导致这种情况:

1. 凝胶浓度与电压

(1) 凝胶浓度: 如果凝胶浓度过高，可能会使蛋白质迁移速度变慢，但在某些情况下，如果凝胶的某些部分浓度不均匀，可能导致蛋白质在不同区域的迁移速度不同，从而造成marker条带变窄的错觉。不过，通常凝胶浓度对条带宽度的影响是整体的，而非逐渐变化。

(2) 电压: 电压过高会加速蛋白质的迁移速度，可能导致marker条带变窄。如果电压在电泳过程中不稳定，也可能造成条带宽度的变化。

2. 样品加载量与电泳时间

通常加载量过多会导致蛋白质在凝胶上的分离不好，条带变宽。但如果marker的加载量相对于其他样品较少，且电泳时间足够长，marker条带可能会因迁移距离更远而显得更窄。

3. pH值与缓冲液

(1) pH值: 蛋白质的电荷状态受pH值影响，进而影响其在凝胶中的迁移速度。如果凝胶或缓冲液的pH值不适宜，可能导致marker条带的迁移速度异常，造成条带变窄。特别是分离胶缓冲液的pH值问题，可能直接影响marker的迁移。

(2) 缓冲液 : 缓冲液的离子浓度和成分也会影响蛋白质的电荷状态。如果缓冲液配制错误或成分不适宜，可能导致marker条带的迁移速度改变，进而造成条带变窄。

(3) 凝胶老化: 老化的凝胶网络可能变得松散，导致蛋白质迁移速度增加，条带可能因此变窄。不过，凝胶老化通常是一个渐进的过程，不太可能导致marker条带在短时间内显著变窄。