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国自然
作者：荷叶
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说起肝内定居型巨噬细胞，我们就想到了Kupffer细胞，那么在正常情况下肝脏是否只有Kupffer细胞一种定居型巨噬细胞呢？
悉尼大学皇家爱尔弗雷德王子医院的Sierro等发现了一群定居在肝包膜下的巨噬细胞（LCM），不同于Kupffer细胞来源于胚胎卵黄囊，LCM来源于血单核细胞。文章发表于2017年8月《Immunity》上（回复
171012
可下载，一周有效），今天荷叶和大家分享此篇论文。
鉴定一群新的细胞可以从以下几个方面着手：1）细胞群的特征，2）起源，3）功能。荷叶从这几方面分析该文章。
第一步，细胞群的特征
细胞群的特征可以分两个方面，①细胞表面有什么特异的标志，②细胞的表达谱是否特异。
作者利用了多光子体内成像（2PM）对体内活细胞进行表面标志的染色，发现肝包膜处的巨噬细胞与Kupffer相比，其伪足（树突）更多更长。与Kupffer一样，CD45+MHCII+F4/80+，但是特异的是：Tim4-CX3CR1+。
为了避免荧光抗体对巨噬细胞的激活，作者采用了多种荧光报告小鼠，结果显示，与Kupffer细胞相比肝包膜处的巨噬细胞特异的表达CD207（Langerin）。
FACS染色进一步确认了体内细胞染色的结果。
同时，肝脏切片荧光染色结果显示CD207是肝包膜下巨噬细胞较特异的标志。
白色虚线为肝包膜
进一步，作者采用目前最先进的细胞分群仪器——质谱流式分析仪，对肝内髓系细胞进行精确分群。结果发现肝包膜巨噬细胞LCM呈CD207+(GFP+)，同时表达CD64+F4/80+Tim4-CX3CR1+（Kupffer细胞Tim4+CX3CR1-）。
以上是通过表面标志对肝包膜下细胞进行分群，那么这群细胞确实是一群独立的肝巨噬细胞吗？为了回答这个问题，作者对这群细胞进行了表达谱的分析，通过生物信息学分析，发现这群细胞表达巨噬细胞相关的核心基因，如Fcgr1，Mafb等，PCA分析显示LCM与Kupffer差异较大，但与皮肤巨噬细胞、肠巨噬细胞接近。
这样我们就能得到肝包膜下巨噬细胞LCM的基本特征，如下图所示：
第二步，LCM来源于什么细胞？
作者首先进行了骨髓移植实验和肝移植实验，发现骨髓细胞能够补充肝脏的LCM。
其次，作者进行了小鼠的联体实验，进一步确认LCM来源于骨髓细胞。同时作者还发现CCR2缺陷骨髓细胞不能补充、更新LCM。
那么是骨髓中的哪群细胞补充LCM呢？通过单核细胞/腹腔巨噬细胞移植实验，发现血中单核细胞能分化成LCM。当以抗生素处理小鼠降低血中单核细胞数目时，LCM的数目同时降低。
深入研究发现，LCM的补充更新依赖CSF-1/CSF-1R信号。肝包膜区域高表达CSF-1，以抗体封闭CSF-1或CSF-1R能显著降低小鼠LCM的数目。
通过上述结果我们得到结论：LCM来源于血单核细胞，并且依赖于CSF-1/CSF-1R信号。
第三步，LCM的功能是什么？
研究发现LCM与肝包膜胶原纤维相邻，具有长的突起（伪足），其一端伸出肝包膜，一端深入肝血窦，并且LCM伪足在不停的运动。
LCM的这种形态结构提示其可能具有感应周围环境的作用，特别是肝包膜外环境。通过腹腔注射BCG模拟腹腔感染，发现LCM能向BCG延伸。同时LCM募集大量的中性粒细胞（Neu），Neu吞噬进入肝脏的BCG。
当以抗CSF-1R抗体降低LCM的数量时，在存在腹腔感染时Neu向肝包膜的募集显著减少，提示Neu的募集确实依赖于LCM（分泌的某些趋化因子或细胞因子等）。
综上所述，本篇文章鉴定了肝内的一群不同于Kupffer细胞的巨噬细胞——肝包膜下巨噬细胞LCM，它们就像边疆的边防战士一样守卫肝脏的周边环境，当来自于腹腔微生物侵袭肝包膜时，LCM及时发出信号，招募大量Neu吞噬、消灭微生物，维持肝脏微环境的稳态。
