手把手教学｜苏木精-伊红染色法（HE染色）的实验流程

一、 实验原理

苏木精 - 伊红染色法（ Hematoxylin-Eosin staining ）简称为 HE 染色，是组织学和组织病理学中常见的化学染色方法之一，在识别不同类型的组织及其形态变化中具有重要意义。苏木精为天然碱性染料，能与细胞核内的核酸等酸性物质以离子键或氢键的形式结合从而将细胞核染成蓝色，伊红则为化学合成的一种酸性染料，其能在水中解离为带负电荷的阴离子，从而与细胞质中带正电荷的蛋白质等物质结合从而将胞质染成红色。蓝色的细胞核与红色的细胞质形成了鲜明的对比，从而便于观察。

二、 实验步骤

1) 样品准备

提前准备好待染色的石蜡切片或冰冻切片（ 注意：两者的染色步骤基本一致，但冰冻切片省略了脱蜡这一步，且染色时间也较石蜡切片短，以下仅以石蜡切片HE染色作一介绍 ）。

2) 脱蜡

二甲苯Ⅰ，10 min → 二甲苯Ⅱ，10 min。

3) 复水

100%乙醇、95%乙醇、85%乙醇、75%乙醇中各5 min → 蒸馏水Ⅰ，2 min →蒸馏水 Ⅱ，2 min。

4) 苏木精染细胞核

苏木精，3 min，而后用蒸馏水洗去浮色。

5) 分化

1%的盐酸酒精分化液中分化30s → 自来水Ⅰ，3 min → 自来水Ⅱ，3min。

6) 伊红染细胞质

伊红染液，2 min，而后用蒸馏水洗去浮色。

7) 脱水

75%乙醇、85%乙醇、95%乙醇、100%乙醇中各1 min。

8) 透明

二甲苯Ⅰ，1 min → 二甲苯Ⅱ，1 min。

9) 封片

在组织中央滴加适量的中性树脂后，一手持载玻片，一手持盖玻片，轻轻让盖玻片中心点接触到中性树脂脂滴的凸点，待其两者接触后，缓缓放下盖玻片，让中性树脂自然地在盖玻片下扩散开来即可，这样可以很大程度上避免气泡产生。

三、 注意事项

1) 实验步骤中的时间需视HE染色试剂盒、组织大小、组织性质、室温等因素而定，初次操作最好预实验探明条件后再进行正式试验；

2) 切片的质量直接影响到染色效果的好坏，一般情况下切片厚度通常为3 μ m左右，且需注意切片要厚薄均匀，铺展平整，组织结构完整；

3)脱蜡一定要彻底，否则残蜡会附着于组织上导致染出来的片子非常脏，甚至影响观察；

4)梯度乙醇、二甲苯需要定期更换新的，乙醇挥发、切片进出带来的水分均会影响试剂，达不到实验的预期效果，这也提醒我们在每次进入下一步之前应该吸干切片上多余的水分；

5)染色过程中切勿干片，否则会导致切片收缩、变形，影响组织形态；

6)采用中性树脂封片时需要注意选择合适的盖玻片，以刚好完全盖住组织为宜；滴加中性树脂需适量，太少不足以覆盖整个组织，太多则会外溢（ 外溢后可用棉签蘸取二甲苯对周围进行擦拭，但一定要小心处理，片子未干前不要碰到盖玻片 ）；封片时最好不要有气泡产生，以免影响观察。

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本文作者是"夏沫梦鸢"同学，在获得授权后，实验老司机将本文发表于公众号。

文稿：夏沫梦鸢

校对：煲仔饭

素材：Canva

参考资料：

• https://en.wikipedia.org/wiki/H%26E_stain

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