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【分析】原位基因编码级联信号放大用于RNA亚细胞定位成像

X-MOL资讯 · 公众号 · · 2020-03-07 08:09

正文

原位信号放大方法如杂交链反应等有较高的灵敏度和较低的检测限，对于测量目标分子的亚细胞空间分布和位置有重要意义。然而，由于探针运载效率低、易降解和潜在的生物安全性，这些方法仍然难以用于活细胞成像。基于基因编码的荧光RNA传感器可以在细胞内转录生成，已被用于检测活细胞内的各种小分子、离子和蛋白质。但是由于缺少信号放大，这些方法对于低含量目标物的成像和定位仍具有挑战，尤其是在哺乳动物细胞中。

近日， 美国马萨诸塞大学 的 尤明旭 教授（通讯作者）等报道了 一种基因编码原位杂交信号放大技术，命名为INSIGHT，并将其应用于活细胞内RNA位置和分布高灵敏成像 。荧光RNA适体Broccoli被分成两条没有荧光的片段，并与发夹H1和H2的两端连接。在没有引发剂 RNA存在时，发夹H1和H2不发生反应，无荧光信号产生。当加入引发剂RNA后，发夹H1与其杂交并被打开。打开的H1可以将发夹H2打开，然后再与下一个H1杂交。基于该原理，一个引发剂RNA可以诱导多个H1和H2发生级联杂交反应，组装生成多个Broccoli，产生可放大的荧光信号。由于组装形成的Broccoli与引发剂RNA相连接，该方法可以用于定位和追踪细胞内RNA目标分子。通过引入一个RNA分子信标，该研究可以被扩展用于多种RNA检测，为活细胞内生物分子传感和定位开辟了新的道路。