近二十年来，研究人员始终在寻找一种靶向雌激素受体，希望通过对该受体加以干预来改善乳腺癌的存活率。《Nature Communications》上刚刚发表的一篇文章认为，这一努力可能永远不也无法达成目的，因为研究人员们所寻找的靶标根本不在他们所预想的位置上。过分依赖于未经充分验证的抗体，导致乳腺癌治疗在20世纪90年代发现雌激素受体β（ESR2）以来再无重大进展。正如未止科技在多篇报道中指出的事实，抗体质量问题正严重危害着生物科研的进步。
斯德哥尔摩KTH皇家理工学院生命科学实验室（SciLifeLab）联合研究中心的研究员Cecilia Williams表示：“β受体的发现改变了我们对雌激素信号传导的理解。它也提出了新的内分泌治疗方法，例如补充雌激素阻断药物他莫昔芬。”
靶向雌激素受体α（ESR1）是乳腺癌中第一个被发现并且也是最重要的生物标志物，ESR1同时也可以帮助预测哪些患者对抗雌激素治疗有反应。但是在治疗中，大约一半的乳腺癌肿瘤对抗雌激素疗法没有反应，或者随着时间的推移会产生耐药性。
Cecilia Williams表示：“我们发现大多数的ERβ抗体的结果呈现假阳性。”随后该研究团队通过WB和质谱仪等方法在众多阳性结果中筛选并确认了抗体PPZ0506的亲和性。（图1）
接下来，他们通过同时对阳性细胞（表达ERβ的HCT116细胞系）和隐性对照细胞（ERα阳性未表达ERβ的T47D细胞系）进行检测，发现了14C8和PPG5/10可以进行“特异性不足”的绑定，也具有亲和性。（图2）
基于PPZ0506与ERβ的亲和性特征，研究人员进一步检测了ERβ受体在癌细胞和正常细胞中的不同形态，并确认了ERβ是表达在内分泌和淋巴组织当中的。（图3）
最终通过对ERβ受体在乳腺中的表达数据的分析得出结论，ERS2与ERS1具有相反的作用，在乳腺癌治疗中，β受体不应该被阻断，而是被激活，这种状态下可以提高存活率。（图4）
Cecilia Williams说：“目前世界上正在进行大量的有关ERβ的临床试验，我们的数据并不是孤立无援的，相当一部分研究采取了激活乳腺癌患者的ERβ受体。虽然我们还不能说这种受体在乳腺肿瘤中完全不存在，不能完全证实过去的看法是错误的，但我们确实正在挑战受体在那里的概念。”
该研究团队表示，他们研究了12种用于检测雌激素受体β的抗体，仅有一种抗体除外，其他的抗体都是无效的。威廉姆斯说：“这些抗体将其他蛋白质误认为ESR2，因此用这些抗体产生的数据是不可信的。”正如未止科技在之前的报道中指出的：几年前，瑞典HPA项目的科学家对5000余种抗体进行了检测，只有49%能正常工作（请参考：【深度】科研抗体的水究竟有多深？起底抗体产业最大隐忧）。
研究还指出，这仅有的一种可以成功应用于β受体的PPZ0506抗体可以在肿瘤组织或健康乳腺组织中同时发现少量的受体。
受该研究的影响，其他多种组织和疾病有关的雌激素的研究的正确性也遭到了挑战。威廉姆斯说：“这些年来许多错误的潜在原因可能是由于免疫组织化学（IHC）领域使用了大量的“特异性不足”的抗体。”
目前研究人员们以前所未有的严谨程度进行了抗体的验证。该团队包括乌普萨拉大学和卡罗林斯卡研究所的研究人员，他们使用阴性和阳性实验组进行对照，并应用了多种基于抗体的应用。比较了44种不同人类组织类型的不同抗体的性能，并通过更大规模的质谱技术进一步鉴定了所结合蛋白。
他们还搜索了大量的基因表达数据库，包括“癌症基因组图谱”、“基因型组织表达”和“人类蛋白质图谱”等，发现在乳腺组织中普遍缺乏雌激素受体β的mRNA。
“我们的研究有助于在使用生物制剂或抗体的研究中提高重现性，并且阐明了以前的在雌激素和乳腺癌领域的争议，从而有助于推动这一领域的发展。最后，我们希望我们的研究将有助于获得更多研究经费和研究时间。“威廉姆斯说（关于促进可重复性的研究，请参考：【最新】GBSI报告：改善生物科研的可重复性，势在必行！）。
乌普萨拉大学研究员安娜·阿斯普伦（Anna Asplund）说：“这项工作应该引起人们的关注。抗体验证工作不过关的问题最近已经被包括《Nature》在内的主要期刊列为头条新闻，我们希望我们的研究与其他正在进行的抗体验证工作能够为该领域带来改。”除去瑞典研究型大学的参与外，埃及Dokki的国家研究中心制药工业部以及美国得克萨斯州休斯敦大学也纷纷参与了这项工作。
未止科技认为，改善抗体质量，提高抗体的可重复性，需要抗体生产商、科研机构以及抗体用户的共同努力。这项研究的发表，无异于再次吹响了抗体验证行动的号角。在未来的抗体市场，抗体验证数据将变得越来越重要 - 未止科技将与各位读者一起，持续关注这个领域。
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参考文献：
Insufficient antibody validation challenges oestrogen receptor beta research，DOI: 10.1038/ncomms15840
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