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液相色谱方法优化——流动相的优化

色谱  · 公众号  ·  · 2024-06-13 20:08

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流动相的优化

液相色谱方法优化,我们前面讲到梯度的优化/流速的优化/柱温的优化,那么现在来说一下比较关键的流动相如何选择。

毒性小的溶剂
在选择溶剂时,我们要尽量选择毒性较小的溶剂。为了确保安全,我们需要了解常用试剂的MSDS(材料安全数据表),特别是了解它们的毒性以及如何处理突发情况。
溶剂互溶性
在选择溶剂时,我们需要确保所选的溶剂彼此之间具有良好的互溶性。这样可以确保溶剂能够充分混合,提供稳定的流动相。
与检测器匹配
根据不同的检测器类型,我们需要选择适合的流动相。例如,在紫外检测器下,流动相的截止波长应低于样品的检测波长;在示差折光检测器下,流动相的折光率与样品的差异应较大;在ELSD(蒸发光散射检测器)下,应选择挥发性或受热分解成气体的流动相;在质谱检测器下,应选择能促进化合物电离的流动相。
低粘度
选择具有低粘度的溶剂非常重要。高粘度溶剂会影响传质和扩散,降低柱效,并增加柱压。
流动相pH

在反相模式下,对于可电离的化合物,我们应调节流动相pH使待测物不电离,处于分子状态。一般来说,对于酸性分析物,我们可以使用流动相pH比分析物酸度系数更低的流动相;对于碱性分析物,我们可以使用流动相pH比分析物酸度系数更高的流动相。

流动相中的缓冲盐
在选择流动相缓冲盐时,我们需要考虑其在有机相中的溶解度。一般来说,运行梯度时不会超过70%有机相,以防止泵头处发生盐析。我们还需要考虑将B相配制成有机相与水混合溶液。
尽量避免使用离子对试剂
如果必须使用离子对试剂,我们应尽量专柱专用,做好标记,因为离子对会改变色谱柱填料的性质。
流动相的纯度
在HPLC中,我们应使用色谱纯的有机相,而在水相中,我们应使用二次纯水或屈臣氏蒸馏水。在质谱分析中,我们需要使用质谱纯的有机相和水。
避免对色谱系统造成损坏
选择溶剂时,我们需要注意避免对色谱系统造成损坏。例如,二氯甲烷会腐蚀泵的金属组件,尽量与其他试剂预混后使用,并及时更换冲洗系统。碱性流动相会对普通色谱柱的硅胶造成溶解塌陷,而有机硅化的色谱柱对碱性环境的稳定性更好一些。
保护样品不受破坏
在选择流动相时,我们需要确保流动相不会对样品造成破坏。
还有对于溶解性差的样品,如果选择不当,可能导致样品析出,从而影响分离,并可能堵塞进样器或色谱柱。
制备后处理方便
选择具有良好挥发性和低沸点的溶剂,有利于制备色谱分离后的馏分处理。

以上就是关于选择流动相的一些建议,希望对你有所帮助。如果还有其他相关问题,请随时提问哦!


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